一种对香豆酸生产菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种对香豆酸生产菌株及其构建方法与应用，所述对香豆酸生产菌株通过对香豆酸代谢合成途径采用从头合成的定向改造方法获得，以葡萄糖为碳源，无需添加酪氨酸底物，生产成本低，具有菌株稳定性高的优点，具有很高的经济效益；由于对香豆酸对菌体本身有毒害作用，因此在应用过程中添加PLP和氯化胆碱，一方面能够保证酪氨酸解氨酶的催化需求，另一方面能够保证菌种活力，提高生产效益，为实现对香豆酸的大规模生产奠定基础，对香豆酸生产菌株利用葡萄糖作为底物，发酵罐中从头直接合成对香豆酸，具有生产成本低，无有毒代谢副产物生成等优点，发酵50h对香豆酸产量可高达11.3g/L，具有非常好的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化合物生物技术及发酵工程技术生产领域，尤其是一种对香豆酸生产菌株及其构建方法与应用。

技术介绍

1、对香豆酸 (p-coumaric acid)，又名对羟基肉桂酸，在植物中广泛存在，是一种天然酚类化合物，具有抗氧化、抗炎和预防心血管疾病的作用，是很多重要化合物的前体。

2、目前对香豆酸合成方法主要为植物提取法、化学合成法、酶催化法和微生物发酵法。植物提取法具有生长周期长、收益率低、受环境影响大、提取成本高等缺点；化学合成法存在能耗高、副产物多、产率低、高污染等问题；酶催化法是由酪氨酸解氨酶作为关键酶催化酪氨酸底物生成对香豆酸，此方法对环境污染少，反应条件温和，但在催化过程中需要添加酪氨酸底物，大大增加了生产成本；微生物发酵法是以葡萄糖作为微生物生长的能量来源，微生物从头合成对香豆酸，无需添加底物，减少了生产成本，发酵过程条件温和，具有工业化生产的潜力，然而现阶段，对香豆酸的生物合成途径中，尚无法通过大肠杆菌高产量从头合成对香豆酸。

技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题在于提本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种对香豆酸生产菌株，其特征在于：是利用代谢工程手段在出发菌株E.coliW3110的基础上进行进一步改造获得的，对csrA、tyrB、tyrAfbr、aroE、aroGfbr基因的表达强度进行调整，对T7 RNAP进行异源表达，对关键酶基因RgTal进行异源表达，构建表达RgTal基因的PETX02质粒，具体为：

2.根据权利要求1所述的对香豆酸生产菌株，其特征在于：所述出发菌株E.coliW3110的保藏号为ATCC 273250。

3.根据权利要求1所述的对香豆酸生产菌株，其特征在于：所述Ptrc启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述...

【技术特征摘要】

1.一种对香豆酸生产菌株，其特征在于：是利用代谢工程手段在出发菌株e.coliw3110的基础上进行进一步改造获得的，对csra、tyrb、tyrafbr、aroe、arogfbr基因的表达强度进行调整，对t7 rnap进行异源表达，对关键酶基因rgtal进行异源表达，构建表达rgtal基因的petx02质粒，具体为：

2.根据权利要求1所述的对香豆酸生产菌株，其特征在于：所述出发菌株e.coliw3110的保藏号为atcc 273250。

3.根据权利要求1所述的对香豆酸生产菌株，其特征在于：所述ptrc启动子的核苷酸序列如序列表seq id no.1所示；所述t7启动子的核苷酸序列如序列表seq id no.9所示。

4.根据权利要求1所述的对香豆酸生产菌株，其特征在于：所述csra基因的核苷酸序列如序列表seq id no.2所示；所述tyrb基因的核苷酸序列如序列表seq id no.3所示；所述tyrafbr基因的核苷酸序列如序列表seq id no.4所示；所述aroe基因的核苷酸序列如序列表seq id no.5所示；所述arogfbr基因的核苷酸序列如序列表seq id no.6所示；所述rgtal基因的核苷酸序列如序列表seq id no.7所示；所述t7 rnap基因的核苷酸序列如序列表seq id no.8所示。

5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐庆阳，肖志刚，马零，陈志超，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：