流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用和方法技术

技术编号：40104526 阅读：14 留言：0更新日期：2024-01-23 18:12

本发明专利技术属于染色体倍性检测领域，本发明专利技术提供了一种流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用和方法。本发明专利技术通过不同部位外植体的诱导培养确定了一个最适的取材部位，并确立了流式细胞仪对藜麦不同部位愈伤组织染色体倍性及其分化能力的判定依据，此方法定量、准确。通过本方法，在藜麦组织培养方面能有效避免因无法判断不同部位愈伤组织是否具有后续分化能力的无效实验，同样适用于对藜麦其他部位组织培养中获得的愈伤进行检测。使用流式细胞仪检测藜麦不同部位染色体倍性在组织培养方面具有重要意义，可以提供关于藜麦染色体倍性的基本信息，这些信息可以为藜麦的遗传改良、育种和组织培养提供有价值的参考，为进一步研究提供依据。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及染色体倍性检测领域，尤其涉及流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用和方法。

技术介绍

1、藜麦(chenopodium quinoa willd.)是藜科藜属植物。原产于南美洲安第斯山脉的哥伦比亚、厄瓜多尔、秘鲁等中高海拔山区。具有一定的耐旱、耐寒、耐盐性，生长范围约为海平面到海拔4500米左右的高原上，最适的高度为海拔3000～4000米的高原或山地地区。

2、藜麦富含的维生素、多酚、类黄酮类、皂苷和植物甾醇类物质具有多种健康功效。藜麦具有高蛋白，其所含脂肪中不饱和脂肪酸占83％，还是一种低果糖低葡萄糖的食物，能在糖脂代谢过程中发挥有益功效。

3、了解藜麦不同部位的染色体倍性有助于选择合适的组织培养外植体材料；在组织培养过程中，染色体倍性可能会发生变化，通过定期检测染色体倍性，可以实时监测这些变化，及时调整培养条件，以维持所需的染色体倍性；染色体倍性的稳定性是评估遗传稳定性的重要指标，通过比较组织培养过程中染色体倍性的变化，可以评估藜麦组织培养的遗传稳定性，从而指导遗传改良工作。因此，提供一种可以实时监测藜麦不同部位组织细胞中染色体倍性的方法具有重要意义。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用和方法，解决现有技术中在藜麦组织培养方面因无法判断不同部位愈伤组织是否具有后续分化能力而进行大量无效实验的技术问题。

2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：</p>

3、本专利技术提供了流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用。

4、本专利技术还提供了一种利用流式细胞仪检测藜麦愈伤组织染色体倍性的方法，包括以下步骤：

5、(1)将样品进行破碎，得到破碎样品；

6、(2)将破碎样品与缓冲液混匀，得到混合样品1；

7、(3)将混合样品1过滤后，滤液与荧光染料混匀，得到混合样品2；

8、(4)混合样品2静置后使用流式细胞仪进行检测。

9、作为优选，步骤(1)中所述样品为藜麦愈伤组织、丛生芽、藜麦腋芽、幼嫩叶片。

10、作为优选，所述藜麦愈伤组织的诱导方法为，将藜麦种子接种到ms培养基中，发芽后第6～8d，取外植体接种于n6培养基，继续培养40～44d获得藜麦愈伤组织；

11、所述外植体为子叶、下胚轴或胚根。

12、作为优选，所述丛生芽的诱导方法为，将藜麦种子接种到ms培养基中，发芽后第20～22d，取顶芽接种于n6培养基，继续培养40～44d获得丛生芽。

13、作为优选，步骤(1)中所述破碎的方法为，将样品与液氮混合后在植物组织粉碎仪进行破碎，所述破碎的频率为48～52hz，破碎的时间为13～17s。

14、作为优选，步骤(2)中所述缓冲液为lb-01buffer缓冲液，所述缓冲液的配方为tris 14～16mmol·l-1，1～3mmol·l-1na2edta，75～85mmol·l-1kcl，18～22mmol·l-1nacl，体积分数为0.05～0.15％trixon x-100；所述缓冲液的用量为0.4～0.6ml。

15、作为优选，步骤(3)中所述过滤用380～420目筛网进行过滤；

16、所述荧光染料为pi/rnase staining buffer荧光染液，所述荧光染料的用量为0.1～0.3ml。

17、作为优选，步骤(4)中所述静置时避光，所述静置的时间为28～32min。

18、作为优选，步骤(4)中所述流式细胞仪使用bdaccui c6 software软件进行记录。

19、本专利技术提供了一种流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用和方法。本专利技术通过不同部位外植体的诱导培养确定了一个最适的取材部位，并确立了流式细胞仪对藜麦不同部位愈伤组织染色体倍性及其分化能力的判定依据，此方法定量、准确。通过本方法，在藜麦组织培养方面能有效避免因无法判断不同部位愈伤组织是否具有后续分化能力的无效实验，同样适用于对藜麦其他部位组织培养中获得的愈伤进行检测。使用流式细胞仪检测藜麦不同部位染色体倍性在组织培养方面具有重要意义，可以提供关于藜麦染色体倍性的基本信息，这些信息可以为藜麦的遗传改良、育种和组织培养提供有价值的参考，为进一步研究提供依据。

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【技术保护点】

1.流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用。

2.一种利用流式细胞仪检测藜麦愈伤组织染色体倍性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2的方法，其特征在于，步骤(1)中所述样品为藜麦愈伤组织、丛生芽、藜麦腋芽、幼嫩叶片。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于，所述藜麦愈伤组织的诱导方法为，将藜麦种子接种到MS培养基中，发芽后第6～8d，取外植体接种于N6培养基，继续培养40～44d获得藜麦愈伤组织；

5.根据权利要求4的方法，其特征在于，所述丛生芽的诱导方法为，将藜麦种子接种到MS培养基中，发芽后第20～22d，取顶芽接种于N6培养基，继续培养40～44d获得丛生芽。

6.根据权利要求5的方法，其特征在于，步骤(1)中所述破碎的方法为，将样品与液氮混合后在植物组织粉碎仪进行破碎，所述破碎的频率为48～52Hz，破碎的时间为13～17s。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于，步骤(2)中所述缓冲液为LB-01buffer缓冲液，所述缓冲液的配方为Tris 14～16mmol·L-1，1～3

8.根据权利要求7的方法，其特征在于，步骤(3)中所述过滤用380～420目筛网进行过滤；

9.根据权利要求8的方法，其特征在于，步骤(4)中所述静置时避光，所述静置的时间为28～32min。

10.根据权利要求9的方法，其特征在于，步骤(4)中所述流式细胞仪使用BD Accui C6Software软件进行记录。

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【技术特征摘要】

1.流式细胞仪在鉴定藜麦愈伤组织染色体倍性上的应用。

2.一种利用流式细胞仪检测藜麦愈伤组织染色体倍性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2的方法，其特征在于，步骤(1)中所述样品为藜麦愈伤组织、丛生芽、藜麦腋芽、幼嫩叶片。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于，所述藜麦愈伤组织的诱导方法为，将藜麦种子接种到ms培养基中，发芽后第6～8d，取外植体接种于n6培养基，继续培养40～44d获得藜麦愈伤组织；

5.根据权利要求4的方法，其特征在于，所述丛生芽的诱导方法为，将藜麦种子接种到ms培养基中，发芽后第20～22d，取顶芽接种于n6培养基，继续培养40～44d获得丛生芽。

6.根据权利要求5的方法，其特征在于，步骤(1)中所述破碎的方法为，将样品与液氮混合后在植物组织粉碎仪进行破碎，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：何婷，李颖波，周龙华，宗营杰，张述伟，刘成洪，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：

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