【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体制备，具体而言，涉及一种间充质干细胞外泌体的提取系统及其制备方法。
技术介绍
1、外泌体是健康细胞和癌细胞均可释放的小膜泡，直径约30-200nm的细胞外囊泡(extracellular vesicle，ev)。外泌体可封装细胞来源的物质包括基因组dna(脱氧核糖核酸)、各种rna(核糖核酸)片段、蛋白质和脂质并释放到细胞外环境。研究表明，人体内的所有体液都含有外泌体，其可近距离或远距离将来源细胞的细胞质成分转移到其它细胞。一旦到达受体细胞，来源细胞的胞浆成分可以改变靶细胞的生物学功能。
2、获取高纯度、高产量、标准化的外泌体，是外泌体广泛应用的前提条件。然而，针对外泌体的分离纯化方法还没有统一的标准，严重制约着外泌体相关的基础研究及临床应用。目前已有多种方法用于分离外泌体，如超速离心法、密度梯度离心法、免疫分离法及聚合沉淀法等，但都具有一定的局限性。
3、超速离心法是最常用的方法，被视为外泌体提取的“金标准”，但需要配备昂贵的超速离心机，且操作复杂，耗时久，产量低，难以在gmp体系下进行规模化富集，中试难度大。现有技术难以实现外泌体的大批量生产，这使外泌体的实际应用受到了很大的限制。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种间充质干细胞外泌体的提取系统及其制备方法，以至少解决现有技术中缺少在gmp体系下进行规模化富集干细胞外泌体的系统和方法的问题。
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种间充质干
3、进一步地，一级过滤单元包括：上清样品储存罐、第一过滤器和第二过滤器；上清样品储存罐用于存储干细胞上清样品；第一过滤器的进液口与上清样品储存罐通过管道连接，第一过滤器用于除去干细胞上清样品中的细胞碎片和颗粒杂质；第二过滤器的进液口与第一过滤器的出液口通过管道连接，第二过滤器的出液口与第一进液口通过管道连接，第二过滤器用于对干细胞上清样品进行一级除菌过滤。
4、进一步地，一级过滤单元还包括：第一输液泵、第一压力传感器和第一阀门；第一输液泵设置于上清样品储存罐和第一过滤器之间的管道上，第一输液泵用于抽吸上清样品储存罐内的液体至中间产品袋内；第一压力传感器设置于第一输液泵和第一过滤器之间的管道上，第一压力传感器用于监测第一过滤器的进口压力；第一阀门设置于第二过滤器和中间产品袋之间的管道上，第一阀门用于控制进入中间产品袋的液体流量。
5、进一步地，浓缩富集单元包括：中空纤维柱和废液袋；中空纤维柱的进液口与第一出液口通过管道连接，中空纤维柱的出液口与第二进液口通过管道连接，中空纤维柱用于对完成一级过滤后的干细胞上清样品进行浓缩富集；废液袋与中空纤维柱的废液出口通过管道连接，废液袋用于收集中空纤维柱排出的废液。
6、进一步地，浓缩富集单元还包括：第二输液泵和第二压力传感器；第二输液泵设置于中间产品袋与中空纤维柱的进液口之间的管道上，第二输液泵用于抽吸中间产品袋内的液体至中空纤维柱中；第二压力传感器设置于第二输液泵和中空纤维柱之间的管道上，第二压力传感器用于监测中空纤维柱的进口压力。
7、进一步地，二级过滤单元包括：第三过滤器和终产品袋；第三过滤器的进液口与第二出液口通过管道连接，第三过滤器用于对完成浓缩富集后的干细胞上清样品进行二级除菌过滤；终产品袋的进液口与第三过滤器的出液口通过管道连接，终产品袋用于接收完成二级除菌过滤的终产品。
8、进一步地，二级过滤单元还包括：第三输液泵和第二阀门；第三输液泵设置于中间产品袋与第三过滤器之间的管道上，第三输液泵用于抽吸中间产品袋内的液体至终产品袋内；第二阀门设置于第三输液泵和第三过滤器之间的管道上，第二阀门用于控制进入终产品袋的液体流量。
9、根据本专利技术的另一方面，提供了一种间充质干细胞外泌体的制备方法，间充质干细胞外泌体的制备方法应用于间充质干细胞外泌体的提取系统，间充质干细胞外泌体的制备方法包括：步骤一：培养间充质干细胞并收集干细胞上清样品；步骤二：通过间充质干细胞外泌体的提取系统进行多级过滤、浓缩富集以提取干细胞上清样品中的外泌体，最终得到终产品；步骤三：对终产品进行检测，检测合格后对终产品进行冻干并保存；步骤一具体包括以下步骤：筛选病毒及传染病检测合格的脐带组织，将其破碎，提取原代细胞；筛选生长情况良好的原代细胞，用无抗生素、无酚红和无血清的培养基对其进行传代、扩增；收集p3或p4代的干细胞上清样品于无菌容器中。
10、进一步地，步骤二具体包括以下步骤：将收集的干细胞上清样品转移至上清样品储存罐中，关闭第二输液泵、第三输液泵和第二阀门同时开启第一输液泵和第一阀门，维持第一过滤器前的第一压力传感器压力为0.2bar；干细胞上清样品流经第一过滤器以除去干细胞上清样品中的细胞碎片和颗粒杂质；之后流经第二过滤器以对干细胞上清样品进行一级除菌过滤；维持20分钟直至干细胞上清样品全部转移至中间产品袋内，此时关闭第一输液泵和第一阀门；其中，第一输液泵的转速为200rpm，第一过滤器的孔径为5um，第二过滤器的孔径为0.22um；关闭第三输液泵和第二阀门，开启第二输液泵，维持中空纤维柱前的第二压力传感器压力为0.1bar，通过中空纤维柱对干细胞上清样品进行反复浓缩富集，浓缩后的干细胞上清样品通过中空纤维柱的浓缩端重新回到中间产品袋内，废液经中空纤维柱的透过端流进废液袋内；维持3个小时并观察中间产品袋中溶液的刻度，溶液刻度在500ml时，关闭第二输液泵，停止浓缩富集；其中，第二输液泵的转速为100rpm，中空纤维柱的膜孔径为100kd；开启第三输液泵和第二阀门，浓缩后的干细胞上清样品经过第三过滤器以对完成浓缩富集后的干细胞上清样品进行二级除菌过滤，最后收集终产品至无菌的终产品袋中，直至终产品袋的溶液刻度达到450ml；其中，第三输液泵的转速为30rpm，第三过滤器的孔径为0.22um。
11、进一步地，步骤三具体包括以下步骤：提前开启生物安全柜紫外照射灯照射生物安全柜30分钟，将终产品放置于生物安全柜中，无菌操作对终产品放进行取样检测；终产品检测合格后将终产品袋中的终产品转移至无菌烧杯中，加入1％甘露醇，0.003％磷酸氢二钠和0.004％磷酸二氢钠，搅拌至完全溶解，分装至多支4ml西林瓶中，将西林瓶放置于冷冻干燥机托盘内，关好箱门进行冻干；其中，每支西林瓶装量为1ml，西林瓶橡胶塞为两侧开口，呈半塞状态；将冻干后的终产品放置于常温阴凉处保存。
12、本专利技术的有益效果：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述一级过滤单元(20)包括：
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述一级过滤单元(20)还包括：
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述浓缩富集单元(30)包括：
5.根据权利要求4所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述浓缩富集单元(30)还包括：
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述二级过滤单元(40)包括：
7.根据权利要求6所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述二级过滤单元(40)还包括：
8.一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞外泌体的制备方法应用于如权利要求1至7中任一项所述间充质干细胞外泌体的提取系统，所述间充质干细胞外泌体的制备方法包括：
9.根据权利要求8所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征
10.根据权利要求9所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤三具体包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述一级过滤单元(20)包括：
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述一级过滤单元(20)还包括：
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述浓缩富集单元(30)包括：
5.根据权利要求4所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其特征在于，所述浓缩富集单元(30)还包括：
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取系统，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：张震，杨丹，邹文婷，沈莉，
申请(专利权)人：成都生基赛尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。