一种重组载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种表达框，所述表达框包括含有特定启动子以及与其表达方向相反的编码组成型EBV病毒蛋白的基因。本发明专利技术还公开了一种重组载体及其构建方法和应用。本发明专利技术通过将重组载体，导入转基因动物模型，利用EBV病毒基因诱导能够被抗原激活的产生抗体成熟B细胞直接发生永生化，并实现体外扩增，可以绕开杂交瘤技术，缩短了整个获得抗体的周期，大幅提升了工作效率。而且本发明专利技术通过特定的载体设计，使得只有在成熟的B细胞内才表达特定对动物有毒性的功能蛋白，也可以开发作为后续重点的抗体发现动物模型开启一个重要的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种重组载体及其构建方法和应用，本专利技术是申请号为2023112728678，专利技术名称为一种基于免疫激活特定启动子诱导b细胞自发永生化的方法的分案申请。

技术介绍

1、杂交瘤技术又称为单克隆抗体技术：将免疫动物的b淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，可以得到既能产生抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞，利用杂交瘤细胞可以大量的生产单克隆抗体。单克隆抗体由单一b淋巴细胞分泌得到，但b淋巴细胞在体外不能长期存活(最多两周)，因此无法制备单一b淋巴细胞群，也无法进行单抗的大量生产。骨髓瘤细胞不具备分泌抗体的能力，但是可以在体外培养条件下无限繁殖。将免疫b淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，得到的杂交细胞具有双亲细胞的遗传特性，既能像b淋巴细胞一样分泌抗体，又能像骨髓瘤细胞一样无限增殖，成功克服了b淋巴细胞在体外存活周期短的问题。对杂交瘤细胞进行培养，即可得到单克隆抗体。

2、细胞融合技术是杂交瘤技术的基础，通过聚乙二醇(peg)(最常用)、仙台病毒、电转等方法对细胞进行人工诱导，可使两个细胞通过膜融合形成单个细胞。

3、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种表达框，其特征在于，所述表达框包括含有特定启动子以及与其表达方向相反的编码组成型EBV病毒蛋白的基因。

2.根据权利要求1所述的表达框，其特征在于，所述特定启动子包括B细胞特异性启动子和浆细胞特异性启动子。

3.根据权利要求1所述的表达框，其特征在于，所述组成型EBV病毒蛋白包括LMP1蛋白和LMP2A蛋白。

4.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求1~3任一项所述的表达框。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括在骨架载体上依次插入ProA-CreERT基因片段、cdsA-IRES-cdsB-...

【技术特征摘要】

1.一种表达框，其特征在于，所述表达框包括含有特定启动子以及与其表达方向相反的编码组成型ebv病毒蛋白的基因。

2.根据权利要求1所述的表达框，其特征在于，所述特定启动子包括b细胞特异性启动子和浆细胞特异性启动子。

3.根据权利要求1所述的表达框，其特征在于，所述组成型ebv病毒蛋白包括lmp1蛋白和lmp2a蛋白。

4.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求1~3任一项所述的表达框。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括在骨架载体上依次插入proa-creert基因片段、cdsa-ires-cdsb-tk基因片段和prob基因片段。

6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑敦武，黎妃凤，段伟婷，
申请(专利权)人：苏州海赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：