【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物细胞，具体涉及一种用于长期保存细胞的保护液及其制备方法。
技术介绍
1、细胞是体外诊断的主要样本来源之一，以细胞作为检测对象在诊断中的占比越来越大，比如ctc或tct等，都是以细胞为对象的诊断。但目前出现的问题是没有一个标准的质控品对整个过程进行质控，无法判断检测结果的准确性及无法溯源造成某些问题出现的原因。
2、细胞作为一种生物制品，目前的保存方法为：长期保存：低温(-80℃)或深低温(-196℃)储存；短期保存：而对于鲜活的细胞产品，常温或冷藏保存的细胞因时间短(通常不超过24h)导致应用范围受限。
3、现有技术中国专利cn116499848actc检测质控品的制备方法：公开了一种ctc检测质控品，其具有能够长期运输保存的优点。他是通过对人t淋巴细胞白血病细胞和肿瘤细胞混合后经初次冷冻、二次冷冻和干燥处理后获得，该方法需要用到专业的冷冻干燥设备，耗时长且成本高。
4、现有技术中国专利cn116569917a一种细胞、细胞保存液、保存方法及应用，公开了将富含糖酵解抑制剂的溶液加入培养液中进行孵育、消化后，离心收集细胞；以富含海藻糖的溶液制备细胞悬液孵育、离心，经pbs缓冲液洗涤后收集细胞；将收集的细胞加入细胞保存液中，置于低温2-8℃下保存或室温18-30℃下保存。该方法保护的是活细胞，时间未超过1周。
5、现有技术中国专利cn116584479a一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用，公开了一种细胞冷藏保护液，配方组成包括复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在活细胞保存时间短，没有一个标准的质控品对整个过程进行质控，无法判断检测结果的准确性及无法溯源的缺点，而提出的一种用于长期保存细胞的保护液及其制备方法。该保护液用于2-8℃的条件下长期保存细胞，时间可达12个月，在维持细胞形态的同时，保证细胞膜和细胞质靶标蛋白不降解。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、设计一种用于长期保存细胞的保护液，所述保护液包括缓冲液、糖类物质、氯化物、醇类物质、表面活性剂和防腐剂。
4、进一步的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、tris缓冲液、hepes缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种的混合溶液。
5、进一步的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液与柠檬酸缓冲液的混合溶液，包括枸橼酸钠、枸橼酸、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，其中，各组分重量百分比为0.001％-1％枸橼酸钠、0.00001％-0.1％枸橼酸、0.00001％-0.1％磷酸二氢钠和0.001％-1％磷酸氢二钠。
6、进一步的，所述糖类物为重量百分比为0.1％-1％的单糖、双糖或多糖类物质，其中，单糖包括葡萄糖、半乳糖、核糖，双糖包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、乳糖，多糖包括葡聚糖、淀粉、糖原、纤维素。
7、进一步的，所述氯化物为氯化镁、氯化钙、氯化钠、氯化钾、氯化铜或氯化锌中的一种或几种混合的氯化物。
8、进一步的，所述氯化物为氯化钠和氯化钾混合的氯化物，各组分重量百分比为0.5％-5％氯化钠和0.001％-1％氯化钾。
9、进一步的，所述醇类物质为重量百分比为0.001％-1％的一元醇、二元醇或多元醇，所述一元醇包括乙醇，所述二元醇包括乙二醇，所述多元醇包括丙三醇、甘露醇、木糖醇、山梨醇。
10、进一步的，所述表面活性剂为重量百分比为0.05％-2％的阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂或非离子表面活性剂，所述阴离子表面活性剂包括硬脂酸、十二烷基苯磺酸钠，所述阳离子表面活性剂包括季铵化物，所述非离子表面活性剂包括烷基葡糖苷(apg)、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、吐温20。
11、进一步的，所述防腐剂为重量百分比为0.5％-5％的醇类、醛类或叠氮化物，所述醇类包括甲醇、乙醇，所述、醛类包括甲醛、多聚甲醛，所述叠氮化物包括叠氮化钠、biocaregpl。
12、为了解决上述技术问题，本专利技术还提出了一种保护液制备方法，用于制备所述的用于长期保存细胞的保护液，具体包括如下步骤：
13、步骤1)、按照各组分重量百分比用分析天平称取枸橼酸钠、枸橼酸、葡萄糖、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠、甘露醇、防腐剂biocaregpl，溶解于1l超纯水中；
14、步骤2)、按照重量百分比用移液器移取吐温20到缓冲液中，将溶液混匀，保存于2-8℃的环境中；
15、步骤3)、调整ph为6.8-7.5，2-8℃保存。
16、与现有技术相比，采用本专利技术提出的一种用于长期保存细胞的保护液及其制备方法，有益效果在于：本专利技术保存液配置方法简单，成本可控，防腐剂biocaregpl与多元醇的混合使用，在保证细胞形态的同时，不损失细胞表面和细胞质中蛋白的结构。用于2-8℃的条件下长期保存细胞，时间可达12个月，在维持细胞形态的同时，保证细胞膜和细胞质靶标蛋白不降解。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述保护液包括缓冲液、糖类物质、氯化物、醇类物质、表面活性剂和防腐剂。
2.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种的混合溶液。
3.根据权利要求2所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液与柠檬酸缓冲液的混合溶液，包括枸橼酸钠、枸橼酸、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，其中，各组分重量百分比为0.001％-1％枸橼酸钠、0.00001％-0.1％枸橼酸、0.00001％-0.1％磷酸二氢钠和0.001％-1％磷酸氢二钠。
4.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述糖类物为重量百分比为0.1％-1％的单糖、双糖或多糖类物质，其中，单糖包括葡萄糖、半乳糖、核糖，双糖包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、乳糖，多糖包括葡聚糖、淀粉、糖原、纤维素。
5.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述氯化物为氯化镁、氯化钙、氯化钠、
6.根据权利要求5所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述氯化物为氯化钠和氯化钾混合的氯化物，各组分重量百分比为0.5％-5％氯化钠和0.001％-1％氯化钾。
7.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述醇类物质为重量百分比为0.001％-1％的一元醇、二元醇或多元醇，所述一元醇包括乙醇，所述二元醇包括乙二醇，所述多元醇包括丙三醇、甘露醇、木糖醇、山梨醇。
8.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述表面活性剂为重量百分比为0.05％-2％的阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂或非离子表面活性剂，所述阴离子表面活性剂包括硬脂酸、十二烷基苯磺酸钠，所述阳离子表面活性剂包括季铵化物，所述非离子表面活性剂包括烷基葡糖苷(APG)、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、吐温20。
9.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述防腐剂为重量百分比为0.5％-5％的醇类、醛类或叠氮化物，所述醇类包括甲醇、乙醇，所述、醛类包括甲醛、多聚甲醛，所述叠氮化物包括叠氮化钠、BiocareGPL。
10.一种保护液制备方法，用于制备权利要求1-7任一项所述的用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，具体包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述保护液包括缓冲液、糖类物质、氯化物、醇类物质、表面活性剂和防腐剂。
2.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、tris缓冲液、hepes缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种的混合溶液。
3.根据权利要求2所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液与柠檬酸缓冲液的混合溶液，包括枸橼酸钠、枸橼酸、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，其中，各组分重量百分比为0.001％-1％枸橼酸钠、0.00001％-0.1％枸橼酸、0.00001％-0.1％磷酸二氢钠和0.001％-1％磷酸氢二钠。
4.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述糖类物为重量百分比为0.1％-1％的单糖、双糖或多糖类物质，其中，单糖包括葡萄糖、半乳糖、核糖，双糖包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、乳糖，多糖包括葡聚糖、淀粉、糖原、纤维素。
5.根据权利要求1所述的一种用于长期保存细胞的保护液，其特征在于，所述氯化物为氯化镁、氯化钙、氯化钠、氯化钾、氯化铜或氯化锌中的一种或几种混合的氯化物。
6.根据权利要求5所述的一种用于长期保存细...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭小玲，杨小二，袁丽，
申请(专利权)人：南京卫凯立生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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