【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及肺鳞癌放射免疫治疗的预后产品，涉及腺苷受体a2ar作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、近年来，放射治疗与免疫治疗联合策略为肺鳞癌领域带来革命性改变，是肺癌综合治疗时代下的突破性尝试。然而，放疗对免疫微环境的调控存在争议,放免联合的疗效获益与放疗分割模式密切相关。常规分割是肺鳞癌临床常用的放疗分割模式，据文献报道，常规分割放疗可能导致肺鳞癌免疫抑制结局，但其调节机制尚不清楚。
3、在固有免疫细胞中，树突状细胞(dendritic cell，dc)作为目前公认最主要的抗原提呈细胞，在介导固有免疫反应和诱导适应性免疫应答中起关键作用。据报道，放疗可通过调控固有免疫细胞影响免疫微环境。但放疗是否对dc细胞产生调控作用及具体机制仍不明确。传统i型树突细胞(conventional dendritic cell，cdc1)是dc细胞的重要亚型，其介导的抗原提呈效应显著优于其他dc细胞亚型，其功能活化可逆转抑制性免疫微环境，是参与抗肿瘤免疫治疗的新型靶细胞，因此探究cdc1细胞功能在放免联合治疗中的意义尤为重要。
4、腺苷是一种被广泛报道的与肿瘤免疫抑制相关的调节因子，由atp水解脱磷酸生成，其受体包括a1r、a2ar、a2br、a3r。腺苷过量产生发生在肿瘤演变的几乎所有阶段，使得腺苷能途径成为一个有
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供腺苷受体a2ar作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用。
2、考虑到在人类受试者中无法进行多次活检，本专利技术通过构建人源化小鼠模型进行验证。本专利技术将患者肿瘤组织块种植于人源化小鼠皮下，构建人源化肺鳞癌小鼠模型，随后给予小鼠常规分割放疗，检测cdc1提呈功能指标mhc-i表达。结果表明，与对照组相比，常规分割放疗组肿瘤浸润cdc1细胞mhc-i表达下调显著，提示常规分割放疗后cdc1抗原提呈能力减弱。考虑到cdc1调控免疫微环境的主要靶细胞是cd8+t细胞，随后本专利技术检测了cd8+t细胞的增殖活性，并针对cd8+t细胞功能指标cd69进行免疫荧光染色，结果显示cd8+t细胞在常规分割放疗后活性下降，并发现活化的cd8+t细胞与活化的cdc1呈显著正相关。于是，本专利技术向肺原位荷瘤小鼠体内注射cdc1耗竭性抗体，并在耗竭组及对照组同步给予抗pd-1抗体治疗，发现耗竭组肿瘤生长速度更快，小鼠生存期更短。与此同时本专利技术收集肺鳞癌患者临床组织样本，发现cdc1细胞功能活化是肺鳞癌患者免疫治疗生存获益的潜在指标。上述数据表明，cdc1功能改变与放射治疗密切相关，这可能具有指导放射免疫联合治疗及预测疗效的重要性。
3、本专利技术进一步研究发现，直接照射肿瘤来源的cdc1不会改变其mhc-i表达。同时，将cdc1与mhc-i分子限制的t细胞(其激活仅受mhc-i分子介导)共培养，并加入荧光素标记的大分子蛋白质(bsa-fitc)模拟抗原物，通过检测t细胞活化水平反映cdc1抗原提呈能力，发现提呈功能变化不显著，因此，常规分割放疗可能通过其它途径抑制cdc1功能。据报道，放疗在杀伤肿瘤细胞的同时，可诱导其释放多种细胞因子，实现对肿瘤免疫微环境的调控。本专利技术构建原代cdc1与人源肺鳞癌肿瘤细胞ebc-1共培养模型，通过上述抗原提呈功能实验发现，经放疗照射后，cdc1的抗原提呈功能受到显著抑制，印证了肿瘤细胞为介导该现象的“中间细胞”。
4、为了明确上述分子机制，本专利技术分选以上两组共培养体系(对照组与放疗组)中的cdc1细胞进行全转录组测序。本专利技术将转录组测序与前期单细胞测序进行联合分析，结果取交集后本专利技术发现差异基因主要富集在cgas/sting信号通路，且常规分割放疗后该通路活性受到显著抑制。nature cancer曾报道，cgas/sting是调控免疫细胞mhc家族的上游信号通路。预实验进一步显示：敲低cdc1细胞cgas表达，mhc-i蛋白水平明显下调，表明cgas/sting是介导cdc1细胞mhc-i表达的关键途径。而cgas/sting作为肿瘤免疫的经典通路，受到腺苷受体家族(a1r、a2ar、a2br、a3r)调控，因此本专利技术利用flowrna技术精准分析cdc1细胞腺苷受体家族各亚型表达丰度，结果表明a2ar表达明显高于其他亚型。进而结合转录组数据对cgas/sting通路与腺苷受体家族进行基因相关性分析，发现cgas/sting与a2ar显著负相关，表明cgas可能受膜蛋白a2ar受体负向调控。基于以上结果，说明膜蛋白受体a2ar是cgas/sting通路的上游调控因子，a2ar/cgas/sting可能在调控cdc1细胞抗原提呈功能中发挥关键作用，同时也为揭示常规分割放疗调控肿瘤细胞进而诱导抑制性免疫微环境的“特殊机制”提供了重要线索。本专利技术发现，给予腺苷刺激后，a2ar受体被激活，cgas/mhc-i通路被抑制。而在此基础上加入a2ar拮抗剂shr-5126，可挽救腺苷介导的cgas/mhc-i通路抑制，提示腺苷是诱导cdc1功能抑制的“特殊信使”。常规分割放疗如何诱导肿瘤微环境高浓度腺苷累积，是本专利技术接下来要研究的重要问题。
5、腺苷由atp水解脱磷酸生成，而肿瘤微环境中的atp主要来源于肿瘤细胞释放。因此，本专利技术针对患者常规分割放疗前后肿瘤组织进行免疫组化染色，以及检测肺鳞癌细胞系ebc-1、kln-205常规分割放疗前后上清腺苷含量，证实肺鳞癌微环境中高浓度腺苷来自肿瘤细胞分泌。目前，关于放疗调控肿瘤细胞分泌腺苷尚无相关报道，具体机制尚待挖掘。糖酵解是肿瘤细胞受到放疗照射后产生atp的基本方式，其产生的atp是腺苷的主要来源，因此进一步挖掘肿瘤细胞糖酵解的可塑性及适应性是探寻其功能特化的关键。本专利技术收集对照组与常规分割放疗组肿瘤细胞上清，利用葡萄糖摄取实验检测证实，常规分割放疗后肿瘤细胞葡萄糖摄取量显著增加。因此本专利技术推测，微环境高浓度腺苷累积是由常规分割放疗诱导的肿瘤细胞糖代谢重编程导致。为了更充分的验证上述推测，本专利技术通过监测常规分割放疗后肿瘤细胞耗氧速率(ocr)及细胞外酸化率(ecar)，发现放疗对肿瘤细胞氧化磷酸化相关指标产生抑制作用，进而糖酵解补偿性增加，warburg效应增强，证明放疗可以将肿瘤细胞的产能方式从氧化磷酸化进一步向糖酵解转化，诱导微环境atp及腺苷累积。除此之外，本专利技术抑制肿瘤细胞的糖酵解关键酶丙酮酸激酶，并给予放射治疗处理，通过检测上清腺苷浓度发现，相较于本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种腺苷受体A2aR作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用。
2.如权利要求1所述的腺苷受体A2aR作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用，其特征是，所述腺苷受体A2aR为cDC1细胞中的A2aR受体。
3.一种放射免疫治疗肺鳞癌的预后标志物，其特征是，其为腺苷受体A2aR。
4.如权利要求3所述的放射免疫治疗肺鳞癌的预后标志物，其特征是，所述腺苷受体A2aR为cDC1细胞中的A2aR受体。
5.一种检测权利要求3或4所述的预后标志物的试剂在制备放射免疫治疗肺鳞癌的预后检测试剂或预后评价试剂中的应用。
6.一种产品，其特征是，包括用于检测权利要求3或4所述的预后标志物的试剂，所述产品用于放射免疫治疗肺鳞癌的预后评估。
7.如权利要求6所述的产品，其特征是，包括检测腺苷受体A2aR表达情况的试剂盒。
8.一种A2aR拮抗剂在制备联合治疗肺鳞癌药物中的应用，其特征是，所述联合治疗为放射治疗与免疫治疗；
9.一种丙酮酸激酶抑制剂在制备联合治疗肺鳞癌药物中的应用，所述联合治疗为放射治疗与免
10.一种药物组合物在制备联合治疗肺鳞癌药物中的应用，所述药物组合物包括丙酮酸激酶抑制剂和药学上可接受的载体，所述联合治疗为放射治疗与免疫治疗；
...【技术特征摘要】
1.一种腺苷受体a2ar作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用。
2.如权利要求1所述的腺苷受体a2ar作为肺鳞癌放射免疫治疗预后标志物的应用，其特征是，所述腺苷受体a2ar为cdc1细胞中的a2ar受体。
3.一种放射免疫治疗肺鳞癌的预后标志物，其特征是，其为腺苷受体a2ar。
4.如权利要求3所述的放射免疫治疗肺鳞癌的预后标志物，其特征是，所述腺苷受体a2ar为cdc1细胞中的a2ar受体。
5.一种检测权利要求3或4所述的预后标志物的试剂在制备放射免疫治疗肺鳞癌的预后检测试剂或预后评价试剂中的应用。
6.一种...
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