鉴定外源插入DNA片段拷贝数的方法及应用技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种鉴定外源插入DNA片段拷贝数的方法及应用。本发明专利技术所述方法用同一对引物扩增转化植株中外源和内源序列，通过比较二者扩增产物的量，判定转化株中携带的外源片段为0、单拷贝、双拷贝或多拷贝。本发明专利技术所述方法在低拷贝的检测中具有高准确度、高通量的优点，且成本极低、对实验环境要求低，在生物工程领域具有很高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测，尤其涉及一种鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法及应用。

技术介绍

1、在水稻品种中，会通过构建载体元件并转化，导入相关目的基因，以获得良好农艺性状的新品种。转化植株中，转基因重组子的随机插入会影响目的基因的表达与遗传的稳定性；过多的拷贝数甚至会导致外源基因转录的沉默，或发生同源重组破坏转化位点。通常转化植株在1-2个低拷贝数时基因表达量最高(flavell rb,inactivation of geneexpression in plants as a consequence of specific sequence duplication.procnatl acad sci usa,1994,91:3490-3496)。而高拷贝转化事件往往会发生基因沉默现象(vaucheret h,et al.,transgene-induced gene silencing in plants.plant j 1998,16:651-659)。为保证外源基因的稳定遗传及后续育种研究，通常需要选择单拷贝转化事件。拷贝数鉴定技术还可用于转化事件后代本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.鉴定外源插入DNA片段拷贝数的方法，其特征在于，所述外源插入DNA片段中包含与受体基因组中单拷贝序列同源的内源片段；所述外源插入DNA片段与所述内源片段存在可识别变异；基于所述外源插入DNA片段与所述内源片段包含的相同或相似序列，设计共用引物对；使用所述共用引物对扩增转化植株的外源插入DNA片段和内源片段；基于同一扩增样本，比较外源插入DNA片段扩增产物量和内源片段扩增产物量，判断外源插入DNA片段拷贝数；

2.根据权利要求1所述鉴定外源插入DNA片段拷贝数的方法，其特征在于，使用所述共用引物对扩增转化植株T0代体细胞的外源插入DNA片段和内源片段；或者，使用所述共用引物...

【技术特征摘要】

1.鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法，其特征在于，所述外源插入dna片段中包含与受体基因组中单拷贝序列同源的内源片段；所述外源插入dna片段与所述内源片段存在可识别变异；基于所述外源插入dna片段与所述内源片段包含的相同或相似序列，设计共用引物对；使用所述共用引物对扩增转化植株的外源插入dna片段和内源片段；基于同一扩增样本，比较外源插入dna片段扩增产物量和内源片段扩增产物量，判断外源插入dna片段拷贝数；

2.根据权利要求1所述鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法，其特征在于，使用所述共用引物对扩增转化植株t0代体细胞的外源插入dna片段和内源片段；或者，使用所述共用引物对扩增转化植株分离后代体细胞的外源插入dna片段和内源片段。

3.根据权利要求1或2所述鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法，其特征在于，所述比较外源插入dna片段扩增产物量和内源片段扩增产物量的方式选自电泳染色法、熔解曲线法或荧光标记法中的至少一种。

4.根据权利要求1-3任意一项所述鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法，其特征在于，所述外源插入dna片段的核苷酸序列包括：seq id no:1。

5.根据权利要求4所述鉴定外源插入dna片段拷贝数的方法，其特征在于，所述内源片段的核苷酸序列包括：seq id...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新鹏，吴群珠，李桂盈，安保光，金雄霞，
申请(专利权)人：海南波莲科技有限公司，
类型：发明
国别省市：