【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及抗微生物剂领域，且更具体涉及感染革兰氏阴性和/或抗酸细菌的噬菌体来源的抗微生物amurin肽和溶素多肽，以及这些肽在杀死革兰氏阴性和/或抗酸(特别是mdr和/或xdr)细菌和对抗细菌感染和污染中的用途，特别是存在于肺系统中，特别是痰液中的那些。
技术介绍
1、革兰氏阴性细菌，特别是假单胞菌(pseudomonas)属的成员和新出现的多药抗性病原体鲍氏不动杆菌(acinetobacter baumannii)，是严重且可能危及生命的侵入性感染的重要原因。假单胞菌感染在烧伤伤口、慢性伤口、慢性阻塞性肺病(copd)、囊性纤维化、植入的生物材料上以及在医院表面和供水系统(在这里其对脆弱的患者构成许多威胁)内的表面生长中构成主要问题。
2、一旦在患者中立足，铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)可能尤其难以治疗。该基因组编码许多抗性基因，包括赋予对β-内酰胺和氨基糖苷抗生素的抗性的多药外排泵和酶，由于缺乏新型抗微生物治疗剂，使得针对这种革兰氏阴性病原体的疗法特别具有挑战性。铜绿假单胞菌在生物膜中生长的能力使该挑战复杂化，所述能力可以通过保护细菌免于宿主防御和化学疗法来增强其引起感染的能力。
3、在健康护理环境中，铜绿假单胞菌的药物抗性菌株的发生率正在增加。在一项社区医院中的健康护理相关的血流感染(bsi)的观察性研究中，铜绿假单胞菌是前四种多药抗性(mdr)病原体之一，占18％的总体医院死亡率。此外，充分记录了mdr铜绿假单胞菌的暴发。结果不佳与经常需要用最后手段的药物(诸如粘菌素)进行治疗的铜绿假单
4、已经被世界卫生组织(who)和疾病控制中心(cdc)鉴定为重大威胁的其他药物抗性细菌包括以下革兰氏阴性细菌：鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌科(enterobacteriaceae)(包括大肠杆菌(埃希氏杆菌属coli)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)和阴沟肠杆菌(enterobacter cloacae))、沙门氏菌属(salmonella)物种、淋病奈瑟氏菌(neisseria gonorrhoeae)和志贺氏菌属(shigella)物种(tillotsong.2018.a crucial list of pathogens.lancet infect dis 18:234-236)。
5、通常在其细胞壁中具有高分枝菌酸含量的抗酸细菌可以通过在实验室染色(诸如ziehl-neelsen染色)期间测量细菌对酸脱色的抗性来鉴定。抗酸细菌可以抵抗基于酸的染色剂的脱色。与革兰氏阴性细菌一样，抗酸细菌(例如放线菌)是危及生命的疾病的原因。例如，分枝杆菌属是放线菌的一个属，并且包括已知引起严重疾病(包括结核病和麻风病)的病原体。结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)通常通过感染肺部而呈现，并且例如当感染的受试者咳嗽、打喷嚏或说话时可以通过空气传播。与铜绿假单胞菌一样，结核分枝杆菌也具有提高的药物抗性菌株发生率，使得结核感染越来越难以治疗。
6、此外，由于感染环境中的因素(诸如肺表面活性物质)，而不是由于抗生素抗性的发展，观察到某些抗生素在对抗革兰氏阴性和革兰氏阳性感染中的有效性降低。例如，某些抗生素(诸如达托霉素)在严重社区获得性肺炎的临床试验中未能达到标准。已经显示这种缺陷是由于达托霉素与肺表面活性物质之间的相互作用，其抑制了这种抗生素对革兰氏阳性生物体的活性，特别是在肺环境中，且更普遍在存在肺表面活性物质的气道环境中。silverman,j.a.等人,“surfactant inhibition of daptomycin,”jid,191:2149-2152(2005)。由此，达托霉素不适用于肺部感染，且更通常为气道(尤其是下呼吸道)感染的治疗，且本领域技术人员不会采用包括达托霉素的治疗方案来治疗此类感染。在存在肺表面活性物质的情况下达托霉素不能对抗感染已经明白地显示在例如koplowicz,y.b.等人,“development of daptomycin-susceptible methicillin-resistant staphylococcusaureus pneumonia during high-dose daptomycin therapy”,clin infect dis.49(8):1286-7(2009)中。最近的研究集中于通过测试和评估结构相关的脂肽a54145的杂交分子的抗细菌活性来克服达托霉素在存在表面活性物质的情况下的无活性。nguyen,k.t.等人,“genetically engineered lipopeptide antibiotics related to a54145 anddaptomycin with improved properties”,antimicrob.agents chemother.2010apr；54(4):1404-1413。
7、肺表面活性物质是上皮衬液的主要组分，其是一种覆盖气道的内表面，降低肺泡内的表面张力的复杂的脂质-和-蛋白混合物。表面活性物质主要由二棕榈酰磷脂酰胆碱(在所有哺乳动物物种中为～80％)以及显著量的磷脂酰甘油(pg)和较少量的次要磷脂、中性脂质和胆固醇构成。存在4种蛋白组分：亲水性蛋白sp-a和sp-d以及疏水性蛋白sp-b和sp-c。goerke,j.,“pulmonary surfactant:functions and molecular composition”,biochim.biophys.acta.1998；1408:79-89。将达托霉素插入由磷脂酰胆碱(pc)和pc/pg构成的人工膜囊泡中。lakey j.h.等人,“fluorescence indicates a calcium-dependentinteraction between the lipopeptide antibiotic ly146032and phospholipidmembranes,”biochemistry 1988；27:4639-45；jung,d.等人,“structural transitionsas determinants of the action of the calcium-dependent antibioticdaptomycin”,chem.biol.2004；11:949-57。
8、由此，在其他方面有效的抗生素被存在于作为感染部位的器官或组织中的因子(诸如在肺部或其他气道和更普遍的呼吸道的感染的情况下的肺表面活性物质)抑制的程度上，会恢复和甚至增强此类抗生素的活性的治疗方案将具有商业和公共健康价值。
9、除了上面讨论的达托霉素外，已知被肺表面活性物质抑制的其他抗生素包括但不限于：妥布霉素，其是一种用于治疗由革兰氏阴性细菌铜绿假单胞菌(肺本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抑制革兰氏阴性细菌的至少一种物种的生长、减少革兰氏阴性细菌的至少一种物种的种群、或杀死革兰氏阴性细菌的至少一种物种的方法，所述方法包括使所述细菌与组合物接触，所述组合物包含有效量的(i)包含选自SEQ ID NO.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列的Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体或其活性片段，或(ii)与选自SEQ IDNO.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体，所述Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体在足以抑制所述生长、减少所述种群、或杀死所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种的一段时间内具有裂解活性。
2.权利要求1所述的方法，其中所述Chp肽包含选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.81和SEQID NO.89的氨基酸序列。
3.权利要求1所述的方法，其中所述溶素-AMP构建体包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列。
4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自肺炎克雷伯氏
5.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自肺炎克雷伯氏菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌和大肠杆菌。
6.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌、木糖氧化无色杆菌、拉氏无色杆菌、Achromobacter dolens和嗜麦芽窄食单胞菌。
7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。
8.抑制痰液中存在的革兰氏阴性细菌的方法，其包括使所述痰液与组合物接触，所述组合物包含有效量的(i)包含选自SEQ ID NO.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列的Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体或其活性片段，或(ii)与选自SEQ ID NO.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体，所述Chp肽、溶素、或溶素-AMP构建体在足以抑制所述生长、减少所述种群、或杀死所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种的一段时间内具有裂解活性。
9.权利要求8所述的方法，其中所述Chp肽包含选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.81和SEQID NO.89的氨基酸序列。
10.权利要求8所述的方法，其中所述溶素-AMP构建体包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列。
11.权利要求8-10任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌、木糖氧化无色杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。
12.预防、破坏或根除革兰氏阴性细菌生物膜的方法，其包括：
13.权利要求12所述的方法，其中所述Chp肽包含选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.81和SEQ ID NO.89的氨基酸序列。
14.权利要求12所述的方法，其中所述溶素-AMP构建体包含SEQ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.抑制革兰氏阴性细菌的至少一种物种的生长、减少革兰氏阴性细菌的至少一种物种的种群、或杀死革兰氏阴性细菌的至少一种物种的方法，所述方法包括使所述细菌与组合物接触，所述组合物包含有效量的(i)包含选自seq id no.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列的chp肽、溶素、或溶素-amp构建体或其活性片段，或(ii)与选自seq idno.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的chp肽、溶素、或溶素-amp构建体，所述chp肽、溶素、或溶素-amp构建体在足以抑制所述生长、减少所述种群、或杀死所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种的一段时间内具有裂解活性。
2.权利要求1所述的方法，其中所述chp肽包含选自seq id no.2、seq id no.81和seqid no.89的氨基酸序列。
3.权利要求1所述的方法，其中所述溶素-amp构建体包含seq id no:149的氨基酸序列。
4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)、鲍氏不动杆菌(acinetobacterbaumannii)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、阴沟肠杆菌(enterobactercloacae)、大肠杆菌(escherichia coli)、木糖氧化无色杆菌(achromobacterxylosoxidans)、拉氏无色杆菌(achromobacter ruhlandii)、achromobacter dolens、多噬伯克霍尔德氏菌(bulkholderia multivorans)、新洋葱伯克霍尔德氏菌(burkholderiacenocepacia)、洋葱伯克霍尔德氏菌(burkholderia cepacia)、pandoraea apista、嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)、解甘露醇罗尔斯顿菌(ralstoniamannitolilytica)、粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)、弗氏柠檬酸杆菌(citrobacterfreundii)、产气肠杆菌(enterobacter aerogenes)、产酸克雷伯氏菌(klebsiellaoxytoca)、kluyvera ascorbate、解鸟氨酸拉乌尔菌(raoultella ornithinolytica)和桑夫顿堡沙门氏菌(salmonella senftenberg)。
5.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自肺炎克雷伯氏菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌和大肠杆菌。
6.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌、木糖氧化无色杆菌、拉氏无色杆菌、achromobacter dolens和嗜麦芽窄食单胞菌。
7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。
8.抑制痰液中存在的革兰氏阴性细菌的方法，其包括使所述痰液与组合物接触，所述组合物包含有效量的(i)包含选自seq id no.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列的chp肽、溶素、或溶素-amp构建体或其活性片段，或(ii)与选自seq id no.1-26、54-67、81-102和129-161的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的chp肽、溶素、或溶素-amp构建体，所述chp肽、溶素、或溶素-amp构建体在足以抑制所述生长、减少所述种群、或杀死所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种的一段时间内具有裂解活性。
9.权利要求8所述的方法，其中所述chp肽包含选自seq id no.2、seq id no.81和seqid no.89的氨基酸序列。
10.权利要求8所述的方法，其中所述溶素-amp构建体包含seq id no:149的氨基酸序列。
11.权利要求8-10任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自铜绿假单胞菌、木糖氧化无色杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。
12.预防、破坏或根除革兰氏阴性细菌生物膜的方法，其包括：
13.权利要求12所述的方法，其中所述chp肽包含选自seq id no.2、seq id no.81和seq id no.89的氨基酸序列。
14.权利要求12所述的方法，其中所述溶素-amp构建体包含seq id no:149的氨基酸序列。
15.权利要求12-14任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌的至少一种物种选自肺炎克雷伯氏菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、大肠杆菌、木糖氧化无色杆菌、多噬伯克霍尔德氏菌和嗜...
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