【技术实现步骤摘要】
本申请涉及酶工程及生物制药领域，具体涉及一种转氨酶、核酸分子、重组表达载体及其应用。
技术介绍
1、沙库比曲作为合成药物entresto(lcz696)的活性药物成分，其含有两个带有甲基和酰胺部分的立体中心，不容易从现有的手性构建块中获得。沙库比曲中的关键手性支架(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸可以通过标准化学方法获得高产量和高对映体和非对映异构体纯度。生物催化转化作为化学方法的替代路线，依赖于转氨酶催化的酮到胺的非对映选择性转氨。
2、胺转氨酶(atas)催化胺和酮(胺供体和酮受体)的分子间交换。转氨酶使用磷酸吡哆醛(plp)作为辅助因子，其机制涉及氧化脱氨和还原胺化半反应。丙氨酸和异丙胺(i-prnh2)经常用作胺供体。虽然转氨酶通常表现出高立体选择性，但大多数野生型转氨酶的缺点是它们的底物范围有限，并且通常很难接受酮一侧大于甲基取代基的基团。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种转氨酶、核酸分子、重组表达载体及其应用，可以解决上述技术问题。
2、本申请实施例提供一种转氨酶，所述转氨酶的氨基酸序列如seq id no：1所示，或者为与所述seq id no：1至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。
3、在一些实施例中，所述转氨酶的氨基酸序列是由seq id no：1所示的氨基酸序列发生一个或多个点突变得到的氨基酸序
4、在一些实施例中，发生所述点突变的氨基酸包括seq id no：1中的第17位氨基酸y、第19位氨基酸f、第57位氨基酸w、第86位氨基酸f、第165位氨基酸y和第284位氨基酸s中的一个或多个。
5、在一些实施例中，所述点突变的取代氨基酸包括甲硫氨酸、组氨酸、丙氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、色氨酸中的一种或者多种。
6、在一些实施例中，发生所述点突变的方式为y17m、f19h、w57a、f86a、f86k、f86n、y165w和s284a中的一种或者多种。
7、在一些实施例中，发生所述点突变的方式为以下任一所示组合：
8、(1)y17m；
9、(2)f19h；
10、(3)w57a；
11、(4)f86a；
12、(5)f86k；
13、(6)f86n；
14、(7)y165w；
15、(8)s284a；
16、(9)y17m、f19h；
17、(10)y17m、f19h、w57a；
18、(11)f86n、y165w；
19、(12)f86n、y165w、s284a；
20、(13)y17m、f19h、w57a、f86n、y165w、s284a。
21、在一些实施例中，所述转氨酶的氨基酸序列为seq id no：3、seq id no：5、seq idno：7、seq id no：9、seq id no：11、seq id no：13、seq id no：15、seq id no：17、seq idno：19、seq id no：21、seq id no：23、seq id no：25或seq id no：27所示。
22、本申请实施例进一步提供了一种核酸分子，所述核酸分子包括用于编码所述转氨酶的核苷酸序列。
23、在一些实施例中，所述核苷酸序列为下述任一项：
24、(a)所述核苷酸序列如seq id no：2所示；
25、(b)所述核苷酸序列与所述seq id no：2至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性；或
26、(c)所述核苷酸序列为(a)或(b)中所述核苷酸序列经密码子优化后获得的核苷酸序列。
27、在一些实施例中，所述核苷酸序列为seq id no：4、seq id no：6、seq id no：8、seq id no：10、seq id no：12、seq id no：14、seq id no：16、seq id no：18、seq id no：20、seq id no：22、seq id no：24、seq id no：26或seq id no：28所示。
28、本申请实施例进一步提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含载体，以及上述的核酸分子。
29、本申请实施例进一步提供了一种转化体，所述转化体包括表达系统，以及所述的核酸分子或所述的重组表达载体。
30、本申请实施例进一步提供了一种酶制剂，所述酶制剂包括所述的转氨酶。
31、本申请实施例进一步提供了一种所述的转氨酶、或所述的核酸分子、或所述的重组表达载体、或所述的转化体、或所述的酶制剂在制备(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸中的应用。
32、在一些实施例中，所述的应用包括：所述转氨酶或所述酶制剂，或者经由所述核酸分子、所述重组表达载体以及所述转化体中的至少一种生成的转氨酶，在制备(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸中的应用。
33、本申请实施例进一步提供了一种(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸的制备方法，包括以下步骤：
34、将(2r)-2-甲基-4-羰基-5-(4-联苯)戊酸作为底物，与磷酸吡哆醛、异丙胺和水混合，以获得混合液；
35、将所述混合液与所述的转氨酶进行转氨接触以发生酶催化反应，生成(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸。
36、本申请的有益效果在于：本申请提供了一种转氨酶、核酸分子、重组表达载体及其应用。本申请的转氨酶具有s-选择性，能够催化(2r，4s)-5-联苯-4-氨基-2-甲基戊酸的生成，相较于现有技术的转氨酶，本申请的转氨酶活性高。本申请利用上述的转氨酶进行酶催化反应，转化率高。
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1.一种转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者为与所述SEQ ID NO：1至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列是由SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列发生一个或多个点突变得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，发生所述点突变的氨基酸包括SEQ IDNO：1中的第17位氨基酸Y、第19位氨基酸F、第57位氨基酸W、第86位氨基酸F、第165位氨基酸Y和第284位氨基酸S中的一个或多个。
4.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，所述点突变的取代氨基酸包括甲硫氨酸、组氨酸、丙氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、色氨酸中的一种或者多种。
5.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，发生所述点突变的方式为Y17M、F19H、W57A、F86A、F86K、F86N、Y165W和S284A中的一种或者多种。
<...【技术特征摘要】
1.一种转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列如seq id no：1所示，或者为与所述seq id no：1至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列是由seq idno：1所示的氨基酸序列发生一个或多个点突变得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，发生所述点突变的氨基酸包括seq idno：1中的第17位氨基酸y、第19位氨基酸f、第57位氨基酸w、第86位氨基酸f、第165位氨基酸y和第284位氨基酸s中的一个或多个。
4.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，所述点突变的取代氨基酸包括甲硫氨酸、组氨酸、丙氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、色氨酸中的一种或者多种。
5.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，发生所述点突变的方式为y17m、f19h、w57a、f86a、f86k、f86n、y165w和s284a中的一种或者多种。
6.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，发生所述点突变的方式为以下任一所示组合：
7.根据权利要求2所述的转氨酶，其特征在于，所述转氨酶的氨基酸序列为seq id no：3、seq id no：5、seq id no：7、seq id no：9、seq id no：11、seq id no：13、seq id no：15、seq id no：17、seq id no：19、seq id no：21、seq id...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱欢龙，周硕，劳淑华，
申请(专利权)人：浙江赞源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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