【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法。
技术介绍
1、纳米-抗体偶联药物是一种新型的生物药，选用聚合物纳米粒子作为抗体的偶联载体，与传统的抗体偶联药物相比具有多种优势，如纳米载药系统有利于增大载药量、控制药物的释放、降低毒副作用、提高药物靶向性等，因此该类药物备受关注。在纳米-抗体偶联药物的开发与研究中，如何评价纳米-抗体是否偶联成功是一项重要的指标。抗体由于其分子结构中氨基酸组成的不同，会使其带有不同的电荷，便会使偶联前后的纳米粒子体现出电荷异质性的差异。因此，灵敏度高、稳定性好、特异性强的电荷异质性检测方法是纳米-抗体偶联药物技术的关键质量控制指标。
2、全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(icief)是一种新型的电荷异质性检测技术，它将毛细管等电聚焦电泳和全柱成像技术结合在一起，通过毛细管电泳将样品分离后实时进行成像记录，提高了电荷异质性分析的重复性和准确性，缩短检测时间，可实现高通量检测。
3、目前针对纳米-抗体偶联药物电荷异质性的分析检测，技术方案还不完整和全面，且分离度、重复性、稳定性均较差。
技术实现思路
1、为解决现有技术的问题，本专利技术基于全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术开发了一种纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法。
2、本专利技术的具体技术方案如下：
3、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤s1，配制上样溶液：将纳米-抗体偶联药
4、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，两性电解质包括ph 2.5-5两性电解质和ph 3-10两性电解质，上样溶液中两性电解质的体积百分比为3-5vol％。
5、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，ph 2.5-5两性电解质和ph 3-10两性电解质的体积比为3:1。
6、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，上样溶液中尿素的摩尔浓度为1-3mol/l。
7、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，等电点标记物为pi 3.27等电点标记物和pi 9.91等电点标记物。
8、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，pi 3.27等电点标记物和pi 9.91等电点标记物在上样溶液中的体积百分比分别为0.4-0.6vol％。
9、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，甲基纤维素溶液中甲基纤维素的质量浓度为0.5-1wt％，上样溶液中甲基纤维素的质量浓度为0.3-0.4wt％。
10、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，上样溶液中精氨酸的摩尔浓度为8-12mmol/l，上样溶液中亚胺二乙酸的摩尔浓度为8-12mmol/l。
11、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，等电聚焦的聚焦电压为3000v，聚焦时间为8-12min，样品室温度为18-22℃。
12、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，还具有这样的技术特征，其中，等电聚焦前还进行预聚焦，预聚焦电压为1500v，预聚焦时间为1-2min。
13、专利技术的作用与效果
14、本专利技术提供的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法的重复性佳、分离度高、稳定性好。
15、单克隆抗体(单抗)与纳米颗粒偶联前后将导致纳米颗粒的等电点和表面电荷发生变化，毛细管内的两性电解质在电场作用下形成ph梯度，通过等电聚焦，不同样品会根据自身电荷异质性差异停留在毛细管内的不同位置从而分离开来，因此可以根据样品的等电点差异对其进行分离并区分出游离单抗、未偶联纳米颗粒(空白纳米颗粒)以及不同偶联水平的纳米-抗体偶联药物。
16、因此，该方法还可用于分离游离单抗、未偶联纳米颗粒(空白纳米颗粒)以及不同偶联水平的纳米-抗体偶联药物，并根据三者的等电聚焦图谱定性评价纳米-抗体是否偶联成功以及其偶联水平。若纳米-抗体偶联药物主峰向游离单抗主峰移动越多则表明抗体偶联水平越高。由于是定性评价，该评价方法适用于空白纳米颗粒电荷异质性与单抗电荷异质性差异较大(通常两者的pi差值≥1)的纳米-抗体偶联药物体系，若单抗和空白纳米颗粒的等电点接近，该方法的分离效果将减弱，也无法定性评价纳米-抗体偶联水平。
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1.一种纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
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7.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
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9.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
10.根据权利要求9所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的纳米-抗体偶联药物的电荷异质性分析方法，其特征在于，
<...【专利技术属性】
技术研发人员：傅慧霞，王美芳，赵国凤，
申请(专利权)人：上海甲贝医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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