一种CD47-SIRPα信号轴生物学活性的体外检测方法技术

本发明专利技术涉及活性检测技术领域，具体来说是一种CD47

【技术实现步骤摘要】
一种CD47
‑
SIRP
α
信号轴生物学活性的体外检测方法


[0001]本专利技术涉及活性检测
，具体来说是一种CD47
‑
SIRPα信号轴生物学活性的体外检测方法。

技术介绍

[0002]免疫系统已经进化到能够检测和破坏患病的靶细胞，比如被病原体感染或癌变的细胞，这些细胞如果不被灭活，就会有潜在的危害，包括巨噬细胞、中性粒细胞和小胶质细胞在内的髓样效应细胞介导的靶细胞清除或修饰，在维持组织内稳定的过程中起到核心作用，该过程通过受体与配体结合传递激活或抑制信号,抑制性受体也称为免疫检查点，包括一系列包含免疫受体酪氨酸抑制性基序(immunoreceptor tyrosine
‑
based inhibitory motif，ITIM)和免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine
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based switch motif，ITSM)的受体，诸如结合CD47的SIRPα，结合MHC I的LILRB1，结合CD24的Siglec...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD47
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SIRPα信号轴生物学活性的体外检测方法，其特征在于，包括构建HEK293
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CD47
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CMV
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lucferase报告基因细胞株与RAW264.7
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SIRPα细胞株，对HEK293
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CD47
‑
CMV
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lucferase报告基因细胞株和RAW264.7
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SIRPα细胞株进行功能验证，加入CD47抗体后检测信号通路是否阻断。2.如权利要求1所述的一种CD47
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SIRPα信号轴生物学活性的体外检测方法，其特征在于所述的HEK293
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CD47
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CMV
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lucferase报告基因细胞株的构建方法具体是:选取HEK293作为宿主细胞，选取质粒与CMV启动子，将CD47与CMV在电极杯中进行电转，将电转后的细胞转入六孔板进行培养，添加CD47与CMV携带的对应抗性药物，杀死不含有CD47质粒与CMV启动子的细胞，观察细胞状态，更换含有相应抗性的培养基，待细胞生长至60%以上平皿时，转入T25瓶中进行扩大培养，用有限稀释法按照每孔0.5个细胞进行铺板，然后进行显微观察，选取孔内仅含有一个细胞群落的进行扩大培养，再进行FACS检测转入基因的表达量情况，选取阳性率85%以上的细胞进行扩培，保存。3. 如权利要求1所述的一种CD47
‑
SIRPα信号轴生物学活性的体外检测方法，其特征在于所述的RAW264...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔灵英，张伟，刘家华，
申请(专利权)人：上海甲贝医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：