【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及一类新型高效低毒抗肿瘤肽，本专利技术还包括该类新型高效低毒抗肿瘤多肽在制备临床抗肿瘤药物以及在联合用药和对抗多药耐药方面的应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤因其高发病率和高死亡率已成为对人类健康的最大威胁[int.j.cancer.2019,144(8):1941–1953；ca.cancer j.clin.2021,71(3):209-249]。据2019年世界卫生组织(who)统计，恶性肿瘤是目前大多数国家人口的第一或第二大死因，全球恶性肿瘤负担将继续上升，据估计，2070年全球恶性肿瘤的发病率将比2020年翻一番[nat rev clin oncol.2021,18(10):663–672]。
2、目前，传统的恶性肿瘤治疗策略主要包括化疗、放疗、手术和免疫治疗[biomolecules.2021,11(8):1120；j.clin.oncol.2020,38,496–520]。根据肿瘤相关数据信息，研究人员正在开发靶向抗肿瘤药物，该类药物在降低副作用、提高药物选择性方面取得了重大进步[neural regen res.2017,12(2):197-200]，但由于肿瘤细胞易对现有的化疗抗肿瘤药物产生耐药性[nat.rev.cancer.2013,13:714–726]，使得化疗药的临床应用受到严重限制。因此，迫切需要开发对正常宿主细胞毒性低和能够有效对抗多重耐药并减轻耐药性的抗肿瘤药物。
3、抗肿瘤肽(acps)是一类具有抗肿瘤活性的短肽，由于具有结构简单、易于合成和修饰、较
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一：提供一类结构简单、制造成本低、抗肿瘤活性强、低溶血毒性的抗肿瘤短肽。
2、本专利技术的目的之二：提供上述抗肿瘤短肽在制备临床抗肿瘤药物中的应用。
3、本专利技术的目的之三：提供上述抗肿瘤短肽在联合用药以及对抗多药耐药方面的应用。
4、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
5、一、一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽的结构设计
6、本专利技术提供的一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽，其结构通式为：llkkllkkllkklx-nh2，标记为14x；
7、其中，x＝l、d、e、aad、asd、asu，所述aad为2-氨基己二酸，asd为氨基庚二酸，asu为氨基辛二酸。
8、具体的，所述抗肿瘤肽为：
9、14l，其氨基酸序列如seq id no.1所示；
10、或：14d，其氨基酸序列如seq id no.2所示；
11、或：14e，其氨基酸序列如seq id no.3所示；
12、或：14aad，其氨基酸序列为leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-aad-nh2；
13、或：14asd，其氨基酸序列为leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-asd-nh2；
14、或：14asu，其氨基酸序列为leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-leu-lys-lys-leu-asu--nh2。
15、上述富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽均采用经典固相合成法制备得到。
16、二、富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽在制备抗肿瘤药物中的应用
17、1、体外抗肿瘤实验
18、通过mtt实验评估本专利技术抗肿瘤肽的体外抗肿瘤活性。所选用的肿瘤细胞包括mcf-7、hela、heparg和a549细胞。具体方法为：将肿瘤细胞接种在96孔板中，1×104/孔，并在37℃和5％ co2培养箱中孵育过夜。用含有不同浓度多肽(2.5μm、5μm、10μm、20μm、40μm)的无血清培养基作用于细胞1h。然后在避光条件下每孔加入10μl mtt(5mg/ml)，孵育4h。轻轻吸走培养基，每孔加入150μl dmso并在微量振荡器震10min。使用多功能酶标仪测490nm处吸光值，计算细胞存活率。对照组的细胞用不含肽的空白培养基处理。实验独立重复三次，每次四个平行。结果如图1所示。
19、图1结果表明本专利技术的所有抗肿瘤肽对多种肿瘤细胞均具有明显的抗肿瘤活性。
20、2、溶血实验
21、取健康小鼠的新鲜血液，800g，4℃，离心5min，弃去上层血清，用pbs清洗红细胞三次后，将其配制成含8％红细胞的悬浮液，每孔100μl加入至96孔板中。将抗癌肽类似物溶解于pbs中，用二倍稀释法配制成不同浓度的肽溶液(12.5-200μm)，等体积加入到含有红细胞的96孔中，将细胞板放至微量振荡器上震1min混匀后，37℃孵育1h。然后将细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽，其特征是，所述抗肿瘤肽结构通式为：
2.如权利要求1所述的一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽，其特征是，所述抗肿瘤肽为：
3.如权利要求1或2所述的一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽在制备临床抗肿瘤药物中的应用。
4.如权利要求3所述的一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽在制备临床抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，将抗肿瘤肽与紫杉醇PTX联用以提高抗肿瘤活性，并减少紫杉醇PTX的用药剂量。
【技术特征摘要】
1.一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽，其特征是，所述抗肿瘤肽结构通式为：
2.如权利要求1所述的一类富含亮氨酸和赖氨酸的高效低毒抗肿瘤肽，其特征是，所述抗肿瘤肽为：
3.如权利要求1或2所述的一类富含亮氨酸和赖氨...
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