【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，具体涉及一种利用hplc-msims法测定驱虫散中的甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的方法。
技术介绍
1、驱虫散为褐色的粉末，气香、味苦、涩，主要成分有鹤虱、使君子、槟榔、芜荑、雷丸、乌梅、大黄、百部、木香等。可用于驱杀畜、禽(鸡、鸭、鹅、鸽子、鹌鹑等)体内各种线虫、吸虫、绦虫及鞭虫等的成虫、幼虫及虫卵，防治畜、禽螨、蜱、虱等寄生性昆虫所致疾病；促进增重，提高生产性能，改善饲料转化率。
2、甲硝唑，是一种抗生素和抗原虫剂，主要用于治疗或预防厌氧菌引起的系统或局部感染。伊曲康唑，主要应用于深部真菌所引起的系统感染，如芽生菌病、组织胞浆菌病、类球孢子菌病、着色真菌病、孢子丝菌病、球孢子菌病等，也可用于念珠菌病和曲菌病。羟基伊曲康唑为伊曲康唑的代谢物杂质。
3、因此，在驱虫散中加入一定剂量的甲硝唑、伊曲康唑使其联合用药，能够提高抑制禽兽体内细菌的繁殖率，增强驱虫效果。但是驱虫散是多味中药进行制备的，成分复杂，难以将其中的甲硝唑、伊曲康唑分离、检测，且伊曲康唑易代谢产生羟基伊曲康唑杂质，如何准确的对驱虫散的甲硝唑、伊曲康唑、以及对杂质羟基伊曲康唑进行质量控制，是一个难题。
4、非法添加甲硝唑，伊曲康唑等驱虫药，一方面能增强驱虫散的疗效，兽药产品疗效好，但是药物进入动物体内，肝脏、肾脏或肌肉组织中有兽药残留蓄积，作为食物进入人体，兽用抗生素进入动物体内后，可产生药物残留，当人们食用了带有兽药残留的“有抗食品”时，一是会引发人们发生过敏反应、荨麻疹及肝肾衰竭等副作用，严重时会发生食
技术实现思路
1、为了提高治疗效果，向驱虫散中加入甲硝唑、伊曲康唑进行联合用药，如何准确的对驱虫散的甲硝唑、伊曲康唑、以及对杂质羟基伊曲康唑进行质量控制是一个技术难点，由于驱虫散的主要成分为鹤虱、使君子、槟榔、芜荑、雷丸、乌梅、大黄、百部、木香等，成分复杂，因此分离、检测需要用探究方法，本而专利技术提供了一种驱虫散中的甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的检测方法，解决了上述难题。
2、本专利技术技术方案的基本原理为：采用高效液相色谱-质谱联用技术，以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图，根据保留时间和离子丰度比对照进行甲硝唑、伊曲康唑羟基伊曲康唑的定性分析，内标法进行甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的定量分析。
3、具体而言，本专利技术的技术方案如下：
4、本专利技术提供了一种驱虫散中的甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的检测方法，包括以下步骤：
5、(1)预处理：称取待测样品于容量瓶中，分别加入甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑对应内标，加入20％乙腈溶液超声提取，加流动相b稀释至刻度；
6、(2)标准曲线配制：量取1.0μg/ml甲硝唑、伊曲康唑和羟基伊曲康唑内标工作液和1.0μg/ml外标工作液适量，用乙腈-0.1％甲酸溶液溶解并稀释配制成系列浓度标准溶液；
7、(3)高效液相色谱-质谱联用测定。
8、进一步的，所述方法为：
9、(1)预处理：称取待测样品于容量瓶中，分别加入甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑对应内标，加入20％乙腈溶液超声提取，加流动相b稀释至刻度；
10、(2)标准曲线配制：量取1.0μg/ml甲硝唑、伊曲康唑和羟基伊曲康唑内标工作液和1.0μg/ml外标工作液适量，用乙腈-0.1％甲酸溶液(10︰90)溶解并稀释配制成系列浓度标准溶液；
11、(3)高效液相色谱-质谱联用测定：
12、所述高效液相色谱条件为：
13、色谱柱：c18柱；流动相a：乙腈-氯化盐溶液；流动相b：0.05-0.5％甲酸水溶液；柱温：35-45℃；流速：0.1-0.5ml·min-1；洗脱方式：梯度洗脱；
14、所述质谱条件为：
15、电离方式：电喷雾电离(esi+)；干燥气温度：320-380℃；干燥气流量：10.0l/min；碰撞气：40psi；毛细管电压：4kv；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多重反应监测。
16、进一步的，所述流动相a为：乙腈-氯化钾或乙腈-氯化钠溶液，所述乙腈与氯化物的体积比为10:1-3。
17、进一步的，所述氯化钾或氯化钠的ph＝3.0-4.0。
18、值得一提的是，专利技术人尝试了乙腈、乙腈-甲酸溶液等多种溶剂作为流动相a，分离度均不理想，最终意外的发现，在流动相a中加入一定比例的氯化物，且调节酸碱度，效果得到显著提升。
19、进一步的，所述梯度洗脱程序为：
20、
21、优选的，所述梯度洗脱程序为：
22、
23、进一步的，所述色谱柱为agilent zorbax eclipse plus c18(3.0×100mm，1.8μm)或waters beh c18(2.1mm×100mm，1.7μm)，优选为agilent zorbax eclipse plus c18(3.0×100mm，1.8μm)。
24、其中，所述标准曲线配制的系列浓度标准溶液为：甲硝唑内标浓度为10ng/ml，外标溶液系列浓度为：1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml，伊曲康唑和羟基伊曲康唑内标浓度为50ng/ml，外标溶液系列浓度为：5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、60ngml、80ng/ml、100ng/ml，供液相色谱-串联质谱测定。
25、其中，检测时进样量为10μl。
26、优选的，所述方法包括以下步骤：
27、(1)预处理：称取待测样品于容量瓶中，分别加入甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑对应内标，加入20％乙腈溶液超声提取，加流动相b稀释至刻度；
28、(2)标准曲线配制：量取1.0μg/ml甲硝唑、伊曲康唑和羟基伊曲康唑内标工作液和1.0μg/ml外标工作液适量，用乙腈-0.1％甲酸溶液(10︰90)溶解并稀释配制成系列浓度标准溶液：甲硝唑内标浓度为10ng/ml，外标溶液系列浓度为：1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml，伊曲康唑和羟基伊曲康唑内标浓度为50ng/ml，外标溶液系本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种驱虫散中的甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相A为：乙腈-氯化钾或乙腈-氯化钠溶液，所述乙腈与氯化物的体积比为10:1-3。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氯化钾或氯化钠的pH＝3.0-4.0。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为Agilent ZORBAX EclipsePlus C18(3.0×100mm，1.8μm)或Waters BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)，优选为AgilentZORBAX Eclipse Plus C18(3.0×100mm，1.8μm)。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线配制的系列浓度标准溶液为：甲硝唑内
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述进样量为10μl。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种驱虫散中的甲硝唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相a为：乙腈-氯化钾或乙腈-氯化钠溶液，所述乙腈与氯化物的体积比为10:1-3。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氯化钾或氯化钠的ph＝3.0-4.0。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为agilent zorbax eclipseplus c18(3.0×100mm，1.8μm)或waters beh c18(2...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤文利，闫硕，李有志，田学磊，郭玉秋，魏秀丽，张传津，章安源，
申请(专利权)人：济宁滨阳生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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