【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种获得单克隆抗体、其片段和缀合物的平台，所述单克隆抗体、其片段和缀合物以高亲和力结合经加工的肿瘤特异性形式的蛋白质，用于医疗和工业用途。更具体而言，本专利技术涉及一种获得单克隆抗体、其片段和缀合物的方法，所述单克隆抗体、其片段和缀合物能够以高亲和力结合对肿瘤而言特异性的经加工形式的trop-2蛋白。这种方法的用途包括表达trop-2的恶性肿瘤的诊断、预后和治疗领域。相关肿瘤包括但不限于乳腺癌、头和颈癌、皮肤癌、结肠直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、前列腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胆囊癌、胆管癌、肾癌、泌尿膀胱癌和绒毛膜癌。
技术介绍
0、现有技术
1、trop-2(ncbi登录号：np_002344.2；seq id no:1)亦称为肿瘤相关钙信号转导蛋白2(tacstd-2)、ga733-1、egp、mr23、mr54、rs-7和t16。trop-2沿着上皮细胞的细胞膜定位，并作为信号转导蛋白发挥作用，其在与抗体交联后诱导细胞内钙信号并激活会聚于akt的生长信号传导网络(guerra,trerotola等人2016)。
2、trop分子(trop-2和trop-1/epcam旁系同源体，后者的ncbi登录号：np_002345.2)的胞外结构域包含ga-733(egf样)结构域和甲状腺球蛋白重复序列，其含有12个保守的半胱氨酸残基。该富含半胱氨酸的区域折叠为球状结构域(seq id no:1的氨基酸31-145)，随后是缺乏半胱氨酸的区域(seq id no:1的氨基酸146-
3、trop-2在人类的大多数癌细胞中过表达(trerotola,cantanelli等人2013)。过表达见于乳腺癌细胞、膀胱癌、卵巢浆液性乳头状癌以及许多其他肿瘤，例如非小细胞肺癌、绒毛膜癌、结直肠癌、前列腺癌和子宫内膜癌中。用sv40转化角质形成细胞诱导的trop-2表达与其正常对应物相比高出3至4倍(schon和orfanos 1995)，这与肿瘤进展中的直接作用相一致。本专利技术的作者已经表明，trop-2通过与参与上皮组织中细胞-细胞间和细胞/基质间粘附的几种蛋白质的相互作用以及对其进行表达调控来驱动癌症的发生和进展。已证明trop2的上调是刺激肿瘤生长的必要条件和充分条件，并且发现trop-2诱导的生长与其表达水平成正比。此外，trop-2的表达与胰腺癌、胃癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌和结直肠癌的预后较差有关。更具体地说，trop-2的膜过表达与乳腺癌的不良预后相关(ambrogi,fornili等人2014)。本专利技术的作者还表明，trop-2可以在不同肿瘤病例中以异质性方式在细胞内区室中显示(trerotola,cantanelli等人2013)，并且高细胞内trop-2表达水平与乳腺癌的结果改善相关(ambrogi,fornili等人2014)，从而表明测量trop-2亚细胞定位对预后程序的有用性。
4、转移性疾病是癌症患者死亡的主要原因，也是治愈癌症的最大障碍，因为转移性癌症在很大程度上对治疗具有抗性。鉴定与转移性表型相关的蛋白质/基因是有用的，因为这些标志物可能有助于在早期阶段鉴定侵袭性病例，并为新型疗法提供新靶标。这项研究是由本专利技术的作者进行的，他们在不相关的癌症转移模型中寻找一致性失调的基因。按照这种方法，本专利技术的作者证明在不同实验环境、肿瘤类型和动物种类的转移性癌症中，trop2是唯一始终上调的基因。对人原发性癌症及其相应转移中trop-2表达的大规模分析显示，trop-2在结肠癌、胃癌、乳腺癌和卵巢癌的转移中过表达。然后证明trop-2过表达驱动转移并影响结肠癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌和卵巢癌的结果。这表明trop-2是肿瘤进展和转移性扩散的诱导物(guerra,trerotola等人2008,trerotola,rathore等人2010,stoyanova,goldstein等人2012,trerotola,cantanelli等人2013)。
5、trop-2在许多人类肿瘤及其转移中的高表达水平使该分子成为“过继性”免疫疗法的一个诱人靶标，即基于施用实验产生的抗体。
6、wo2010089782和wo2016087651描述了能够高效识别和结合trop-2分子不同区域的抗trop-2单克隆抗体，用于癌症中的诊断性和治疗性用途。
7、戈沙妥珠单抗(sacituzumab govitecan-hziy)是一种与sn-38拓扑异构酶i抑制剂缀合的人源化抗trop-2单克隆抗体，已表明其对转移性三阴性乳腺癌(tnbc)患者有效(bardia,mayer等人2019)，并作为trodelvy获得fda的加速批准用于临床使用(www.fda.gov/drugs/drug-approvals-and-databases/drug-trial-snapshot-trodelvy)。这表明靶向trop-2的单克隆抗体可用于生成治疗癌症，包括已进展至转移的晚期病例的药物。
8、技术难题
9、trop-2的表达并不仅限于肿瘤。trop-2也在正常人类组织中表达，在皮肤、食管、扁桃体、角膜中以高水平表达，在肺部、胰腺外分泌部、前列腺、唾液腺、尿路上皮、胆管、乳腺、肾脏中以低水平表达，有时在胃部和子宫内膜中表达。与由增殖性上皮细胞表达的trop-1不同，trop-2主要由处于分化晚期的上皮细胞表达。在表皮中，在基底上层的角质形成细胞中检测到trop-2的表达，并朝皮肤表面方向逐渐增加，其中在角质层中表达水平最高。
10、正常组织中的抗原表达造成了严重的在靶毒性问题，这极大地限制了高效力靶向疗法的使用。比伐珠单抗美坦辛(bivatuzumab mertansine)针对肿瘤相关的含v6的cd44变体，该变体也在皮肤角质形成细胞和其他上皮细胞中表达，一项比伐珠单抗美坦辛的1期剂量递增研究显示，发生了严重的皮肤毒性和在最高剂量下第二次输注后由于出现大范围表皮坏死松解症导致的一次致命事件(tijink,buter等人2006)。bay794620是一种靶向ca9抗原(该抗原也在消化道内表达)的adc，在两名患者中显示出致死性胃肠道毒性(临床研究报告编号：ph-37705/12671.bayer healthcare,2014)。具体而言，对于trop靶向抗癌疗法，在患者中观察到了正常表达该分子的器官所涉及的不良反应。高亲和力人源化抗trop-1单克隆抗体ing-1在患者中导致急性胰腺炎病例(de bono,tolcher等人2004)。而且，在最近一项针对晚期或转移性实体瘤患者的1期剂量递增研究中，抗trop-2/aur0101抗体-药物缀合物pf-066641本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种获得单克隆抗体或者其片段或缀合物的方法，所述单克隆抗体或者其片段或缀合物以高亲和力与靶蛋白结合，所述靶蛋白是在局部和转移性肿瘤中特异性表达的蛋白，其中所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶蛋白是Trop-2，并且所述免疫原性材料选自包括以下的组：由Trop-2的胞外部分组成的肽，即SEQ ID NO:1的氨基酸31-274，由Trop-2的球状结构域组成的肽，即SEQ ID NO:1的氨基酸31-145，由Trop-2的“茎”结构域组成的肽，即SEQ ID NO:1的氨基酸146-274，其中所述肽在下列之一中产生：转化的人肾上皮细胞293、乳腺癌MCF-7、鼠纤维肉瘤L和NS-0骨髓瘤细胞、Sf9蛾细胞、酵母细胞、大肠杆菌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肿瘤包括乳腺癌、头和颈癌、皮肤癌、结肠直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、前列腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胆囊癌、胆管癌、肾癌、泌尿膀胱癌和绒毛膜癌及其转移。
4.根据权利要求1或2所述的方法，目的是获得用作药物的单克隆抗体或者其片段或缀合物
5.根据权利要求1或2所述的方法，目的是获得单克隆抗体或者其片段或缀合物，以将其用于在受试者中诊断肿瘤或转移和/或评估发生肿瘤或转移的风险和/或预后肿瘤或转移和/或用于监测肿瘤或转移的进展和/或用于监测治疗性处理的功效和/或用于筛选对肿瘤或转移的治疗性处理。
6.一种对在局部或转移性肿瘤中表达的Trop-2蛋白具有特异性的抗体，其中所述抗体与Trop-2上糖基化残基N120和N208之间包含的非线性表位结合，其中所述表位位于在R87和T88之间切割的Trop-2蛋白上，其中残基编号按照SEQ ID NO.1。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述非线性表位选自包括以下的组：由Trop-2的胞外部分组成的肽，即SEQ ID NO:1的氨基酸31-274，由Trop-2的球状结构域组成的肽，即SEQID NO:1的氨基酸31-145，由Trop-2的“茎”结构域组成的肽，即SEQ ID NO:1的氨基酸146-274。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述肽在下列之一中产生：转化的人肾上皮细胞293、乳腺癌MCF-7、鼠纤维肉瘤L和NS-0骨髓瘤细胞、Sf9蛾细胞、酵母细胞、大肠杆菌细胞。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是1B4抗Trop-2单克隆抗体，由保藏于以下国际保藏单位(IDA)的杂交瘤分泌：意大利热那亚，IRCCS OspedalePoliclinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定登录号为PD21005。
10.根据权利要求6至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是1A9抗Trop-2单克隆抗体，由保藏于以下国际保藏单位(IDA)的杂交瘤分泌：意大利热那亚，IRCCS OspedalePoliclinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定登录号为PD21006。
11.一种药物组合物，其包含至少一种根据权利要求6-10中任一项所述的抗体。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗人类受试者癌症的方法中。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种获得单克隆抗体或者其片段或缀合物的方法，所述单克隆抗体或者其片段或缀合物以高亲和力与靶蛋白结合，所述靶蛋白是在局部和转移性肿瘤中特异性表达的蛋白，其中所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶蛋白是trop-2，并且所述免疫原性材料选自包括以下的组：由trop-2的胞外部分组成的肽，即seq id no:1的氨基酸31-274，由trop-2的球状结构域组成的肽，即seq id no:1的氨基酸31-145，由trop-2的“茎”结构域组成的肽，即seq id no:1的氨基酸146-274，其中所述肽在下列之一中产生：转化的人肾上皮细胞293、乳腺癌mcf-7、鼠纤维肉瘤l和ns-0骨髓瘤细胞、sf9蛾细胞、酵母细胞、大肠杆菌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肿瘤包括乳腺癌、头和颈癌、皮肤癌、结肠直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、前列腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胆囊癌、胆管癌、肾癌、泌尿膀胱癌和绒毛膜癌及其转移。
4.根据权利要求1或2所述的方法，目的是获得用作药物的单克隆抗体或者其片段或缀合物，优选将其用于预防和/或治疗肿瘤和转移，更优选用于预防和/或治疗表达trop-2的肿瘤和转移，甚至更优选将其与至少一种治疗剂或治疗组合。
5.根据权利要求1或2所述的方法，目的是获得单克隆抗体或者其片段或缀合物，以将其用于在受试者中诊断肿瘤或转移和/或评估发生肿瘤或转移的风险和/或预后肿瘤或转移和/或用于监测肿瘤或转移的进展和/或用于监测治疗性处理的功效和/或用于筛选对肿瘤或转移的治疗性处理。
6.一种对在局部或转移性肿瘤中表达的trop-2蛋白具有特异性的抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：萨韦里奥·阿尔贝蒂，M·特罗托拉，
申请(专利权)人：地中海治疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。