【技术实现步骤摘要】
一、本专利技术涉及药物制备，特别是一种归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法及其应用。
技术介绍
0、二、
技术介绍
1、乳腺癌已经超过肺癌，成为世界上最常见的恶性肿瘤。其中三阴性乳腺癌(tnbc)是最难治的乳腺癌亚型，复发风险高，预后差。随着肿瘤免疫治疗的成功，乳腺癌也进入了免疫治疗的时代。尽管这些亚型中pd-l1的突变频率和表达都很高，但大多数患者对免疫治疗仍无反应。
2、以往试图提高乳腺癌免疫治疗有效性的研究主要集中在重塑微环境的宿主因素上。除宿主因素外，肿瘤内共生微生物群已被证明是肿瘤微环境的重要组成部分，对肿瘤免疫治疗具有深远的影响。研究发现一些肿瘤内共生微生物群会破坏免疫监视，从而在诱导肿瘤免疫治疗耐药性。值得注意的是，在乳腺癌中也发现了丰富多样的肿瘤驻留微生物群。具核梭杆菌是一种常见的口腔革兰氏阴性厌氧菌，长期以来一直被认为与牙周病的发生有关。近来研究表明具核梭杆菌在乳腺癌中也广泛流行，并创造了一个免疫抑制的肿瘤微环境，造成免疫治疗的抵抗。因此，精准的消除乳腺癌中的具核梭杆菌可能是克服免疫治疗耐药的一种新的潜在策略。
3、抗生素仍然是目前临床上最有效的抗菌药物。抗生素甲硝唑对于具核梭杆菌等厌氧菌有强大的杀灭作用。然而，全身系统使用抗生素可能会对体内其他微生物群造成严重损害。研究表明，肠道微生物群在肿瘤免疫治疗中起着至关重要的作用，全身给药抗生素对接受免疫检查点阻断疗法的患者有负面影响。因此，在不破坏全身微生物群平衡的情况下，精确定点递送抗生素清除肿瘤内致病微生物是至关重要的。>
4、目前，尚未见有通过归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统实现精准的消除乳腺肿瘤中的具核梭杆菌来提高肿瘤免疫治疗效果的报道。
技术实现思路
0、三、
技术实现思路
1、针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法及其应用，可通过归巢肿瘤乏氧释药，达到药物在肿瘤部位的有效积累，在减少化疗药物毒副作用的同时，可在保持体内微生物群平衡下消除乳腺肿瘤驻留的具核梭杆菌来解除免疫抑制，提高肿瘤的免疫治疗效果。
2、本专利技术解决的技术方案是，提供一种归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，包括以下步骤：
3、1)将铁蛋白(ftn)溶液均匀分散于ph＝8的20ml tris-hcl缓冲液中，60℃水浴加热1h，随后将阿霉素(dox)溶液均匀加入反应体系中，ftn与dox质量比为2：1～6：1，继续搅拌3h，静置室温后，将反应溶液用100kda的超滤管在2000rpm下离心10min，pbs洗涤3次，得到溶液a；
4、2)将2.5mg azo与摩尔比3：1～1：1的nhs、edc溶解于200μl dmso溶液中，在黑暗中搅拌2h以活化azo，然后将20-50mg mtz与活化的azo、步骤1)制备的溶液a混合，在黑暗条件下搅拌过夜，最后将混合物转移到100kda的超滤管中，在2000rpm下离心10min，去除游离物质，随后冷冻干燥，得到粉末b；
5、3)取大鼠腹股动脉血液，以3000rpm离心获得红细胞，用0.25×pbs(1:40体积比)裂解红细胞4h，12000rpm离心，pbs洗涤3次，得到红细胞膜(rbcm)，备用；将培养的具核梭杆菌用pbs稀释至od值0.5，在5000rpm下离心10min，用pbs洗涤3次，得到细菌沉淀，然后，每毫升0.5od值的菌液沉淀加入100μl溶菌酶溶液(10mg/ml)，在37℃下孵育30min，最后，在7000rpm下离心10min，pbs洗涤去除细菌内容物，得具核梭杆菌膜(fm)；将得到的fm与rbcm按质量比1：3～3：1超声均匀混合，然后通过物理挤压法，得到杂化膜c(hm)；
6、4)将步骤3)得到的杂化膜c与步骤2)得到的粉末b按质量比1：6～1：2混合，超声波细胞破碎仪处理，并采用物理挤压法得到仿生递药系统d(mtz/ftn-dox@hm)。
7、所述的步骤3)中，培养的具核梭杆菌为：将具核梭杆菌菌落转移到5ml的bhi液体培养基中，在37℃厌氧条件下培养过夜，获得处于指数生长期的细菌。
8、所述的bhi液体培养基为：脑心浸出粉17.5g、蛋白胨10.0g、葡萄糖2.0g、氯化钠5.0g、磷酸氢二钠2.5g、蒸馏水1000ml、ph7.2-7.6。
9、所述的步骤4)中，超声波细胞破碎仪处理条件为100w，超声2s，停止3s，共5min。
10、优选的，所述ftn和dox的比例，按质量比，计为5：1。
11、优选的，所述nhs和edc，按摩尔比，计为1：1。
12、优选的，所述mtz，按质量，计为30mg。
13、优选的，所述fm和rbcm，按质量比，计为1：1。
14、优选的，所述c和b，按质量比，计为1：2。
15、所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统的水合粒径为100nm左右。
16、所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统在增强归巢肿瘤免疫治疗药物中的应用。
17、所述的药物包括化疗药物、克服肿瘤基质屏障药物和免疫激活药物等。
18、所述的归巢肿瘤治疗类型包括乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌和肝癌等高表达gal-galnac的多种肿瘤类型。
19、本专利技术通过归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统实现精准的消除乳腺肿瘤中的具核梭杆菌来提高肿瘤免疫治疗效果，是归巢肿瘤药物仿生递药系统上的创新。
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1.一种归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，所述的步骤3）中，培养的具核梭杆菌为：将具核梭杆菌菌落转移到5mL的BHI液体培养基中，在37℃厌氧条件下培养过夜，获得处于指数生长期的细菌。
3. 根据权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，所述的步骤4）中，超声波细胞破碎仪处理条件为100 W，超声2 s，停止3 s，共5min。
4.根据权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统在增强归巢肿瘤免疫治疗药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统在增强归巢肿瘤免疫治疗药物中的应用，其特征在于，所述的药物包括化疗药物、克服肿瘤基质屏障药物和免疫激活药物。
【技术特征摘要】
1.一种归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，所述的步骤3）中，培养的具核梭杆菌为：将具核梭杆菌菌落转移到5ml的bhi液体培养基中，在37℃厌氧条件下培养过夜，获得处于指数生长期的细菌。
3. 根据权利要求1所述的归巢肿瘤乏氧释药的仿生递药系统制备方法，其特征在于，所述的步骤4）中，超声波细胞破碎仪处理...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘军杰，郭鹏克，耿世珍，李新灵，王静，时雅茹，曹梦唸，张云雅，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：
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