【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制品，具体涉及一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体疫苗及重组病毒疫苗和应用。
技术介绍
1、
2、痘病毒(poxvirus)是一类较大的dna病毒，基因组约200～300kbp，主要包括痘苗病毒(vacciniavirus，vacv)、天花病毒(variolavirus)、牛痘病毒(cowpox virus)和猴痘病毒(monkeypox virus)等。1982年，痘病毒表达载体被首次提出，并迅速广泛用于疫苗开发以及众多领域的研究。痘病毒表达载体具有结构简单、能够容纳大量外源dna和高表达水平等优点。此外，痘病毒的复制位置在位于细胞质的病毒工厂中，而非宿主的细胞核内，这大大降低了病毒dna整合到宿主基因组中的可能性，从而阻断了对宿主基因的干扰，并降低了其致癌的可能性，这使其成为表达来自各种病原体异源抗原的理想载体系统。改良型痘苗病毒安卡拉株(modified vaccinia virus ankara，mva)是由vacv作为母毒株，在cef细胞中连续传代500次以上得到的。经过传代致弱后的mva仅可以在禽类细胞中复制，而无法在人类等大多数哺乳动物细胞中完成病毒复制，因此mva作为理想的疫苗载体，被广泛应用于针对各种人类及哺乳动物疫病的疫苗创制，包括流感病毒疫苗、非洲猪瘟病毒疫苗、口蹄疫病毒疫苗和蓝舌病病毒疫苗等人用和兽用疫苗都在研发中或已获批准，具有非常广阔的应用前景。因此，mva是真核生物基因或外源病毒基因表达的理想载体和疫苗载体。
3、然而重组载体疫苗的免疫性高低，与插入外源基因
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体疫苗，通过优化外源基因的插入位点，从而提高外源基因编码的蛋白的表达，从而提高疫苗免疫效果。
2、本专利技术提供了一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体，外源插入有编码原始或改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列和改良型痘苗病毒安卡拉株的基因组序列或mva069r与mva070l的基因序列；
3、所述编码原始或改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列插入在改良型痘苗病毒安卡拉株的mva069r和mva070l基因之间。
4、优选的，所述改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列如seq id no:2所示。
5、优选的，所述重组载体为prk5-s；
6、所述prk5-s的核苷酸序列如seq id no:3所示。
7、本专利技术提供了一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组病毒，由所述重组载体包装得到。
8、本专利技术提供了所述表达新型冠状病毒s蛋白的重组病毒的制备方法，包括以下步骤：
9、用改良型痘苗病毒安卡拉株感染细胞，得到感染的细胞；
10、将所述重组载体转染至所述感染的细胞中，培养收集病毒，得到表达新型冠状病毒s蛋白的重组病毒。
11、优选的，所述细胞包括df-1细胞。
12、优选的，在所述感染后2h进行重组载体的转染。
13、本专利技术提供了所述重组病毒在制备防治新型冠状病毒感染的疫苗中的应用。
14、本专利技术提供了一种防治新型冠状病毒感染的疫苗，包括所述重组病毒和佐剂。
15、本专利技术提供了一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体，外源插入有编码原始或改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列和改良型痘苗病毒安卡拉株的基因组序列或mva069r与mva070l的基因序列；所述编码原始或改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列插入在改良型痘苗病毒安卡拉株的mva069r和mva070l基因之间。本专利技术通过优化插入改良型痘苗病毒安卡拉株的基因位置能够避免mva载体病毒生长速度受到插入基因的干扰。实验证明，本法通过将编码新型冠状病毒s蛋白的基因序列插入在改良型痘苗病毒安卡拉株的mva069r和mva070l基因之间，比插入在传统的iii基因缺失位点能够产生更高滴度的mva载体病毒，为了作为疫苗毒更好地大量生产和扩繁提供了基础。
16、进一步的，本专利技术还限定了改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列。本专利技术在sars-cov-2s蛋白编码序列的基础上进行了如下改造，将s蛋白胞内域和跨膜区替换为i型胶原蛋白α1链c端前肽，使s蛋白形成三聚体，具有更好的免疫原性，同时突变了s蛋白的furin裂解位点(rrar682-685gsas)以及七肽重复序列1/中心螺旋顶端(kv986-987pp)，保证了s蛋白表达后不裂解为s1和s2蛋白，从而保证了s蛋白的原始构象，有利于抗原表位的暴露；此外对编码基因进行密码子优化，保证了外源基因在病毒中的表达水平。
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1.一种表达新型冠状病毒S蛋白的重组载体，其特征在于，外源插入有编码原始或改良的新型冠状病毒S蛋白的基因序列和改良型痘苗病毒安卡拉株的基因组序列或MVA069R与MVA070L的基因序列；
2.根据权利要求1所述表达新型冠状病毒S蛋白的重组载体，其特征在于，所述改良的新型冠状病毒S蛋白的基因序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述表达新型冠状病毒S蛋白的重组载体，其特征在于，所述重组载体为Prk5-S；
4.一种表达新型冠状病毒S蛋白的重组病毒，其特征在于，由权利要求1～3中任意一项所述重组载体包装得到。
5.权利要求4所述表达新型冠状病毒S蛋白的重组病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述细胞包括DF-1细胞。
7.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，在所述感染后2h进行重组载体的转染。
8.权利要求4所述重组病毒在制备防治新型冠状病毒感染的疫苗中的应用。
9.一种防治新型冠状病毒感染的疫苗，其特征在于，包括权
...【技术特征摘要】
1.一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体，其特征在于，外源插入有编码原始或改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列和改良型痘苗病毒安卡拉株的基因组序列或mva069r与mva070l的基因序列；
2.根据权利要求1所述表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体，其特征在于，所述改良的新型冠状病毒s蛋白的基因序列如seq id no:2所示。
3.根据权利要求1所述表达新型冠状病毒s蛋白的重组载体，其特征在于，所述重组载体为prk5-s；
4.一种表达新型冠状病毒s蛋白的重组病毒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭辰，朱俊达，吴文学，张子卉，李雅睿，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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