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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及超声分子影像学和生物医学工程领域,具体地涉及一种改良的血小板膜仿生微泡超声造影剂及其制备方法。
技术介绍
0、技术背景
1、仿生微泡是近年来新兴的一类微泡造影剂,可获得原生物膜的天然属性,通过生物膜上的多种特异性蛋白实现生物体内的病灶靶向功能。血小板膜仿生微泡超声造影剂,通过使用血小板膜制备微泡进行超声造影,利用血小板膜表面的多种蛋白模拟血小板在体内黏附,同时实现黏附过程的超声可视化,在多种炎症性疾病的靶向诊断有重要的应用价值。
2、该微泡表面的血小板膜特异性蛋白阳性率是最重要的特征参数之一,阳性率接近100%时说明几乎所有微泡表面均负载了血小板膜的特异性蛋白,该微泡作为靶向造影剂的特异性及敏感性提升。如果仅仅利用血小板膜制备微泡,理论上阳性率可接近100%,但是造影效果不佳且成本高昂。现有技术中提出血小板膜中掺入磷脂成分,可以提高微泡的稳定性,实现良好的超声造影效果;然而,微泡表面特征性蛋白阳性率较低。
技术实现思路
1、一方面,本申请提供了一种微泡,包含细胞膜和磷脂,所述磷脂包含二棕榈酰磷脂酰甘油。
2、在一些实施方式中,所述磷脂还包含二棕榈酰磷脂酰胆碱;
3、在一些实施方式中,所述磷脂中二棕榈酰磷脂酰甘油和二棕榈酰磷脂酰胆碱的摩尔质量比为1:(5~20);
4、在一些实施方式中,所述磷脂中二棕榈酰磷脂酰甘油和二棕榈酰磷脂酰胆碱的摩尔质量比为1:(8~10)。
5、在一些实施方式中,所述细胞膜
6、在一些实施方式中,所述细胞膜选自红细胞、白细胞、或血小板细胞膜中的一种或多种;
7、在一些实施方式中,所述细胞膜选自血小板的细胞膜;
8、在一些实施方式中,所述细胞膜的膜蛋白与所述磷脂的质量比为1:(2~50);
9、在一些实施方式中,所述细胞膜的膜蛋白与所述磷脂的质量比为1:(5~20)。
10、在一些实施方式中,所述微泡还含有惰性气体;
11、在一些实施方式中,所述惰性气体选自氦气、氖气、氩气、六氟化硫和氟碳气体中的一种或几种;
12、在一些实施方式中,所述惰性气体选自c3f8;
13、在一些实施方式中,所述微泡的大小为0.3~4.0μm。
14、一方面,本申请提供了所述微泡的制备方法,包括如下步骤:将细胞膜与脂质体混合并通入气体,机械振荡形成包含细胞膜的微泡超声造影剂;
15、在一些实施方式中,所述微泡的制备方法包括如下步骤:
16、s1:从外周血中提取血小板;
17、s2:差速离心法提取血小板膜;
18、s3:薄膜-水化法制备脂质体;
19、s4:将s2制备的细胞膜与s3制备的脂质体混合并通入气体,机械振荡形成包含细胞膜的脂质微泡;
20、在一些实施方式中,所述步骤s1包括以下步骤:
21、s11.取血样于抗凝采血管中;
22、s12.将与s11中血样等体积的血细胞分离液加入离心管中,吸取血样并将其平铺于细胞分离液的液面之上,室温下200~250g离心5~20min;
23、s13.步骤s12离心后,吸取分离液中的血浆;
24、s14.向步骤s13吸取的血浆中加入5~15ml细胞洗涤液混匀细胞,300~800g离心15~25min,弃上清;
25、s15.重复步骤s14,得血小板悬液。
26、在一些实施方式中,所述步骤s2包括以下步骤:
27、s21.向步骤s1分离的血小板悬液中加入含蛋白酶抑制剂、磷脂酶抑制剂及前列腺素的pbs重悬;
28、s22.将步骤s21所得的重悬液在液氮中冻存5~15min,置于室温融化,反复冻融三次;
29、s23.在超声破碎仪下进行破碎,10000~12000g离心20~40min,得到血小板膜。
30、在一些实施方式中,所述步骤s3包括以下步骤:
31、s31.将磷脂和氯仿以20mg:(3~8)ml比例混匀;
32、s32.将s31制备的溶液在旋转蒸发仪真空作用下形成磷脂薄膜;
33、s33.在s32制备的磷脂薄膜中加入pbs水化液,并在旋转蒸发仪加热水浴下水化,形成脂质体。
34、在一些实施方式中,所述步骤s4包括以下步骤:
35、s41.气体置换:将步骤s3制备的脂质体与步骤s2制备的血小板膜混合,通入c3f8置换空气;
36、s42.将步骤s41的混合溶液机械震荡,机械震荡频率为3000-5000cpm,时间为40~50s形成血小板膜仿生微泡。
37、一方面,本申请提供了所述微泡在制备靶向超声造影剂中的应用;
38、在一些实施方式中,所述微泡用于制备靶向黏附炎症部位的超声造影剂;
39、在一些实施方式中,所述微泡用于制备靶向诊断的超声造影剂;
40、在一些实施方式中,所述微泡用于制备药物靶向运输的超声造影剂。
41、一方面,本申请提供了一种靶向超声造影剂,所述靶向超声造影剂包含所述微泡。
42、本申请的脂质配方改良使得表面蛋白阳性率显著提升,阳性率提升后可以更敏感地实现微泡的靶向黏附。
43、所述微泡超声造影剂的表面血小板特异性蛋白阳性率:30-100%。
44、本专利技术中经过反复摸索磷脂配方,使得阳性率显著提升,可达95%以上,同时维持了良好的体内外超声造影效果。
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1.一种微泡,其特征在于,包含细胞膜和磷脂,所述磷脂包含二棕榈酰磷脂酰甘油。
2.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述磷脂还包含二棕榈酰磷脂酰胆碱;
3.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述细胞膜选自大鼠、小鼠、兔、狗、猪或人血细胞的细胞膜;
4.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述微泡还含有惰性气体;
5.一种如权利要求1-4任一所述微泡的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将细胞膜与脂质体混合并通入气体,机械振荡形成包含细胞膜的微泡超声造影剂;
6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1包括以下步骤:
7.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S2包括以下步骤:
8.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S3包括以下步骤:
9.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S4包括以下步骤:
10.如权利要求1-4任一所述的微泡在制备靶向超声造影剂中的应用;
【技术特征摘要】
1.一种微泡,其特征在于,包含细胞膜和磷脂,所述磷脂包含二棕榈酰磷脂酰甘油。
2.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述磷脂还包含二棕榈酰磷脂酰胆碱;
3.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述细胞膜选自大鼠、小鼠、兔、狗、猪或人血细胞的细胞膜;
4.如权利要求1所述的微泡,其特征在于,所述微泡还含有惰性气体;
5.一种如权利要求1-4任一所述微泡的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将细胞膜与脂质体混合并通...
【专利技术属性】
技术研发人员:游宇佳,尹庭辉,任杰,缪小燕,邓欢,姚伟锋,张新玲,
申请(专利权)人:中山大学附属第三医院,
类型:发明
国别省市:
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