【技术实现步骤摘要】
本申请属于医药生物，具体涉及一种重组人α-防御素5及其制备方法和应用。
技术介绍
1、防御素是一类2-5kda大小的富含半胱氨酸的阳离子短肽，广泛存在于植物，昆虫和哺乳动物中。根据结构差异，防御素家族分为三个不同的种类：α-防御素、β-防御素和θ-防御素。其中α-防御素和β-防御素在人类和其他哺乳动物中都有表达，但θ-防御素只存在于非人类灵长类动物中。
2、就人类而言，目前已鉴定出六种人α-防御素。根据基因组成和来源的不同，α-防御素又被分为人中性粒细胞多肽1-4(hnp1、hnp2、hnp3和hnp4)和人肠防御素5-(hd5和hd6)两类。其中肠源性防御素hd5和hd6主要在肠道潘氏细胞(paneth cell,pc)中表达。
3、研究表明，hd5是一种主要由小肠隐窝基底部的潘氏细胞分泌的广谱性宿主性防御肽，成熟肽分子由32个氨基酸残基组成，富含精氨酸和半胱氨酸，在生理ph下带4个正电荷，其氨基酸序列中6个半胱氨酸形成3对二硫键，其成键方式为c1-c5、c2-c4、c3-c6，且空间上呈β-片层样结构。
4、hd5作为一种防御抗菌肽，对多种致病菌(例如艰难梭菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等)具有广谱抗菌性，对多种病毒(例如乳头瘤病毒、腺病毒、疱疹病毒等)也表现出较好的抗病毒活性，另外，相关研究表明hd5在人体免疫调节以及多种肿瘤的发生发展中也具有重要的影响，因此，对于hd5在医药领域用途的深入研究，对于增强医疗健康保障水平是具有重要的技术意义的。
5、现有研究虽然表明hd5具有广
技术实现思路
1、本申请目的在于通过对hd5分子结构研究，提供一种改进型的重组人α-防御素5(hd5)分子，从而可为相关疾病的防控奠定一定技术基础。
2、本申请所采取的技术方案详述如下。
3、一种重组人α-防御素5，其结构相较于原始天然结构的hd5，其v19和l29突变为r；结构突变调整后的mhd5蛋白的氨基酸序列(32aa)如seq idno.1所示，具体如下：
4、atcycrtgrcatreslsgrceisgrlyrrccr；
5、对应的编码核苷酸序列(99bp)如seq id no.2所示，具体如下：
6、gccacctgctattgccgaaccggccgttgtgctacccgtgagtccctctccgggcgttgtgaaa tcagtggccgcctctacagacgctgctgtcgctga。
7、以pet32a或pgex-4t-1质粒为载体，重组mhd5的编码核苷酸序列后，转化bl21的de3型(bl21(de3))感受态细胞，并利用iptg诱导蛋白表达可获得本申请的重组人α-防御素5。
8、所述重组人α-防御素5可应用于制备新冠病毒sars-cov-2(covid-19)的防治药剂。
9、所述重组人α-防御素5可应用于制备革兰氏阴性致病菌防治药剂中，所述革兰氏阴性致病菌例如为：肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)、奇异变形杆菌(bacillusmirabilis)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、或弗格森埃希菌(escherichiafergusonii)。
10、所述重组人α-防御素5在制备抗氧化活性药剂中的应用，重组人α-防御素5具有清除dhhp、abts+自由基能力。
11、本专利技术的有意效果：
12、为提高现有天然hd5的应用效果，不同技术人员针对hd5分子结构中不同位点氨基酸进行了不同尝试，但不同改造方式所导致的实际技术效果也是差异较大的。本申请中，专利技术人通过对现有天然防御素hd5蛋白结构研究，通过对其特点位点氨基酸突变，将其结构突变调整成新的mhd5蛋白。进一步通过原核表达方式获得相关重组蛋白后，初步实验结果表明，结构突变调整后的新防御素mhd5蛋白具有更好的抗氧化性能、更好的抑菌效果，尤其是针对不同新冠毒珠刺突蛋白rbm蛋白表现出较好的结合力，这些结果都为mhd5在化妆品、食品保鲜、免疫制剂等领域相关产品的应用提供了较好的理论支持，同时也为其他生物医药蛋白的改进提供了新的技术思路。
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1.一种重组人α-防御素5，其特征在于，mHD5蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体如下：
2.编码权利要求1所述的重组人α-防御素5的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：
3.制备权利要求1所述的重组人α-防御素5的方法，其特征在于：以pET32a或pGEX-4T-1质粒为载体，重组权利要求2所述的核苷酸序列后，转化BL21的DE3型感受态细胞，利用IPTG诱导蛋白表达。
4.权利要求1所述的重组人α-防御素5在制备新冠病毒SARS-CoV-2防治药剂中的应用。
5.权利要求1所述重组人α-防御素5在制备防治革兰氏阴性致病菌防治药剂中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性致病菌为：肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌或弗格森埃希菌。
7.权利要求1所述重组人α-防御素5肽作为抗氧化活性肽的、非治疗目的的应用。
【技术特征摘要】
1.一种重组人α-防御素5，其特征在于，mhd5蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，具体如下：
2.编码权利要求1所述的重组人α-防御素5的基因，其核苷酸序列如seq id no.2所示，具体如下：
3.制备权利要求1所述的重组人α-防御素5的方法，其特征在于：以pet32a或pgex-4t-1质粒为载体，重组权利要求2所述的核苷酸序列后，转化bl21的de3型感受态细胞，利用iptg诱导蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：柴连琴，常新悦，张林杰，荆玉普，王继稳，张海燕，孟景会，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：
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