【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及阴道炎相关病原体的检测，更具体地，涉及b族链球菌、化脓性链球菌和乳杆菌的检测。
技术介绍
1、需氧菌性阴道炎(aerobic vaginitis，av)是一种在2002年才被正式认识并命名的阴道感染，它是以阴道内乳杆菌减少或缺失、需氧菌增多为主要特点的常见阴道感染性疾病。它的特征是阴道分泌物中存在异常的阴道菌群，含有需氧菌、肠道细菌。临床主要表现为黄色阴道分泌物、分泌物异味、外阴烧灼感或刺痛、性交痛等，查体可见阴道黏膜红肿、溃疡或一定程度的阴道黏膜萎缩等表现。有症状者症状持续时间长、间歇性加重，且治疗后易复发。av易与其他阴道疾病共同发生，如bv(bacterial vaginosis)和阴道念珠菌病(vulvovaginalcandidiasis)。它可能与性交困难、性传播感染(如人乳头状瘤病毒、人类免疫缺陷病毒、阴道毛滴虫和沙眼衣原体)、绒毛膜羊膜炎、胎儿感染、早产有关。av是常见的阴道感染性疾病之一。av的诊断方式目前多数采用的donders阴道分泌物显微镜湿片评分，最理想的是使用相差显微镜。
2、无乳链球菌，又称为b组链球菌(group b streptococcus，gbs)，是一种β溶血的革兰氏阳性细菌。b组链球菌是一种严重威胁新生儿的细菌，其主要存在于孕妇阴道的下1/3处，阴道入口处和肛门周围，而在阴道上1/3处和宫颈部相对较少。对于孕妇来说，这个细菌可以引起产前，产后的生殖道感染，主要表现为急性绒毛膜羊膜炎、产后子宫内膜炎、肺炎、脑膜炎、肝脓肿和败血症等。
3、化脓性链球菌(streptococcus pyogenes)又称a族链球菌(group aofstreptococcus，gas)，是人类细菌感染中最重要的病原之一。化脓性链球菌可侵及人体的任何部位，但以上阴道、其次皮肤软组织感染为最常见的原发感染部位。化脓性链球菌可引起化脓性疾病及非化脓性并发症两类疾病。由化脓性链球菌间接所致的非化脓性并发症即免疫性疾病：风湿热和急性肾小球肾炎。化脓性链球菌亚型多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。近年来由化脓性链球菌所引起的严重感染，侵袭性化脓性链球菌感染发病率的增长及其所致严重后果，也引起了人们对该类细菌感染更大的关注。
4、乳酸杆菌是兼性厌氧、无芽孢、生产乳酸的革兰氏阳性杆菌，它们是口腔、胃肠道和女性泌尿生殖道中的常见微生物。乳酸杆菌通常被认为是非致病细菌，一些菌株还被用作益生菌以预防和治疗某些疾病。而需氧菌性阴道炎则是以阴道内乳杆菌减少或缺失，需氧菌增多引起的阴道炎症。
5、av患者阴道菌群多样性增加，病原体相对复杂，以b族链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌等多种需氧菌和兼性厌氧菌增多常见。目前在因细菌导致的阴道炎的诊断和治疗方面还存在一些不足。将女性的阴道菌群分为“正常”、“中间性”或“细菌性阴道炎”会导致无法发现有重大感染性疾病的女性，从而导致治疗不当和不全面。特别是在妊娠期，缺乏适当的诊断规范导致了许多错误的观念和治疗失败的研究，通过对av的认识及诊断，可以更全面地解释这些问题。
6、因此，本领域需求一种产品能够简单、快速地检测上述不同的病原体，以便为后续治疗提供针对性的策略，并且灵敏度高，特异性好。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种阴道炎相关病原体检测的组合物，包括：
2、如seq id no:1～3所示的检测b族链球菌的上游引物、下游引物及探针；
3、如seq id no:4～6所示的检测化脓性链球菌的上游引物、下游引物及探针；以及
4、如seq id no:7～9所示的检测乳杆菌的上游引物、下游引物及探针。
5、本专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光pcr分析方法，通过检测不同靶点，对不同类型的病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实b族链球菌、化脓性链球菌、乳杆菌的检测和区分，以便为后续治疗提供针对性的策略。本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到500拷贝/ml，特异性好，检测更为准确。
6、进一步地，所述组合物包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
7、在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。
8、在一个具体的实施方案中，内标是rnase p或者β-球蛋白。
9、在一个具体的实施方案中，所述组合物还包括如seq id no:10～12所示的检测内标的上游引物、下游引物及探针。
10、进一步地，本专利技术组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
11、在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用atto425、quasar705、fam、hex、rox和cy5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
12、在一些具体的实施方案中，b族链球菌探针的荧光报告基团为fam；化脓性链球菌探针的荧光报告基团为hex；乳杆菌探针的荧光报告基团为rox；内标的荧光报告基团为cy5。
13、进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物和探针对中的一对或多对。在本专利技术中，“对”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
14、本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应4个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
15、举例来说，可以包括上述4对引物和探针中的任意3对，可以包括上述4对引物和探针中的任意2对，也可以包括上述4对引物和探针中的任意1对。
16、在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光pcr。
17、进一步地，探针的3’末端还具有非荧光淬灭剂。
18、进一步地，探针的3’末端还具有淬灭基团，例如bhq1或bhq2。
19、在一个具体的实施方案中，探针的3’末端为bhq1。
20、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分分别存在于单独包装中。
21、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分存在于同一个包装中。
22、进一步地，本专利技术的组合物的各成分以混合的形式存在。
23、第二方面，本专利技术提供了上述本专利技术的组合物在制备阴道炎相关病原体检测的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为b族链球菌、化脓性链球菌、乳杆菌。
24、第三方面，本专利技术提供了一种阴道炎相关病原体检测的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述本专利技术的组合物。
25、进一步地，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
26、在一个具体的实施方案中，阴性质控品是depc h2o、生理盐水、内标基因中的至少一种。阳性质控品是b族链球菌、化脓性链球菌、乳杆菌的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种阴道炎相关病原体检测的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括如SEQ ID NO:10～12所示的检测内标的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，B族链球菌探针的荧光报告基团为FAM；化脓性链球菌探针的荧光报告基团为HEX；乳杆菌探针的荧光报告基团为ROX；内标的荧光报告基团为CY5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物在制备检测阴道炎相关病原体的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为B族链球菌、化脓性链球菌、乳杆菌。
7.一种阴道炎相关病原体检测的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～5中任一项所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
9.根据权利要求7或8所
10.一种用于制备阴道炎相关病原体检测的组合物的用途，所述检测包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种阴道炎相关病原体检测的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括如seq id no:10～12所示的检测内标的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，b族链球菌探针的荧光报告基团为fam；化脓性链球菌探针的荧光报告基团为hex；乳杆菌探针的荧光报告基团为rox；内标的荧光报告基团为cy5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
【专利技术属性】
技术研发人员：张萌，刘佩珊，任小梅，吴康，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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