【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物制剂，尤其涉及一种含益生菌的胃滞留缓释片剂及其制备方法。
技术介绍
1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种微厌氧、螺旋状的革兰氏阴性菌，常定植于人体胃部及十二指肠内。幽门螺杆菌感染可导致消化不良、胃炎、消化性溃疡等一系列胃肠道疾病，是引发胃癌的重要因素，被世界卫生组织确定为第ι类致癌因子。幽门螺杆菌感染通常为终生感染，需要进行根除治疗，否则难以自行消除。“三联疗法”和“四联疗法”是目前常规的幽门螺杆菌根除治疗方法，然而随着幽门螺杆菌的抗生素耐药性在全球范围内的逐渐增强，其根除成功率在不断下降。而且，过量使用抗生素会引起肠道内菌群紊乱及其带来的一系列不良反应。
2、益生菌是一种活性微生物，当摄入量足够时，会对宿主产生健康益处。目前已有大量基础研究和临床研究聚焦于益生菌的不同健康功效，包括用于辅助幽门螺杆菌根除治疗。益生菌通过增强胃黏膜屏障作用、分泌抗菌物质、竞争黏附位点干扰幽门螺杆菌定植及改善胃内炎症等功能来提高幽门螺杆菌的根除率、降低抗生素疗法带来的不良反应及缓解症状。
3、专利申请cn114949202a公开了一种益生菌和蛋白质的组合物及其抗幽门螺杆菌的应用，该专利技术所述的组合物包括动物双歧杆菌bb-12、嗜酸乳杆菌ncfm、蛋黄球蛋白粉及白藜芦醇，该组合物具有较好的抑制幽门螺杆菌的能力，能够显著地清除人体内的幽门螺杆菌，减少胃癌的发生。
4、然而，现有技术中的具有抑制或清除幽门螺杆菌功效的益生菌产品的剂型大多为咀嚼片、粉剂，在胃排空的作用
技术实现思路
1、本专利技术提供一种含益生菌的胃滞留缓释片剂及其制备方法。
2、本专利技术提供一种含益生菌的胃滞留缓释片剂，所述片剂中，益生菌的活菌数与死菌数之比为(0.25～4)：1；所述益生菌和/或所述益生菌的代谢产物均具有抗幽门螺杆菌活性。
3、现有技术中的益生菌固体制剂大多仅关注活菌数的含量，通过尽可能地避免在加工过程中的活菌损失，保证较高的活菌数含量，以更好地发挥功效。然而，本专利技术在开发用于抗幽门螺杆菌的胃滞留缓释片剂的过程中，意外地发现对于胃滞留缓释片剂这种剂型，将益生菌的活菌数与死菌数控制在上述比例范围内，有利于益生菌菌体及代谢产物在胃中以特定比例缓释，活菌能够提供具有抗幽门螺杆菌作用的胞外代谢产物以及与幽门螺杆菌共凝聚作用，死菌破裂后能够提供具有抗幽门螺杆菌作用的胞内代谢产物(例如短链脂肪酸等)，未破裂的死菌可与幽门螺杆菌产生共凝聚作用，进而使得益生菌及其代谢产物在抗幽门螺杆菌方面更好地协同作用，显著提高抗幽门螺杆菌的效果。
4、优选地，所述益生菌对幽门螺杆菌的相对抑菌圈直径≥3.5±0.1cm；
5、和/或，所述益生菌与幽门螺杆菌的交互凝集率≥65％；
6、和/或，所述益生菌与幽门螺杆菌混合时的尿素酶活力od550≤0.45±0.05。
7、在保证片剂中益生菌的活菌数和死菌数之比的基础上，对于益生菌的选择，将益生菌及其代谢产物的抗幽门螺杆菌活性控制在上述范围内，更有利于保证益生菌及其代谢产物在抗幽门螺杆菌方面协同作用，显著提高抗幽门螺杆菌的效果。
8、上述抗幽门螺杆菌活性指标中，益生菌对幽门螺杆菌的相对抑菌圈直径、益生菌与幽门螺杆菌的交互凝集率、益生菌与幽门螺杆菌混合时的尿素酶活力均可采用本领域已知的常规方法进行测定。
9、其中，益生菌对幽门螺杆菌的相对抑菌圈直径的测定方法为：采用琼脂扩散法测量益生菌对幽门螺杆菌的抑制活性，以mrs液体培养基作为空白对照。取200μl幽门螺杆菌的菌悬液(≥107cfu/ml)均匀涂布于哥伦比亚血琼脂平板上，每孔加入待测液体200μl(分别为益生菌发酵上清液和空白对照)。将接好待测液体的平板置于37℃、微需氧环境下培养48～72h，培养结束后，用游标卡尺测量抑菌圈直径，相对抑菌圈直径＝实验组抑菌圈直径-对照组抑菌圈直径。
10、益生菌与幽门螺杆菌的交互凝集率的测定方法为：采用酶标仪测定益生菌与幽门螺杆菌的交互凝集率，测定幽门螺杆菌重悬液和益生菌菌悬液的od600的数值，分别记为x1和x2。取50μl幽门螺杆菌重悬液和益生菌菌悬液等体积比混合，测定其吸光值记为xmix1，后将其放置于37℃恒温培养箱孵育24h，在t时取上清液测定吸光值，记为xmix2。初始凝集率a0＝[(x1+x2)-2xmix1]/(x1+x2)，t时凝集率at＝[(x1+x2)-2xmix2]/(x1+x2)，交互凝集率a＝at-a0。
11、益生菌与幽门螺杆菌混合时的尿素酶活力od550的测定方法为：采用比色法测定样品的尿素酶活性，取40μl幽门螺杆菌分别与10μl益生菌菌悬液混匀，以10μl的无菌幽门螺杆菌液体培养基为对照。将混合液加入至干净无菌的96孔板中，37℃微需氧环境培养48h。将培养好的混合液体取出，每个孔内加入150μl的尿素酶试剂(0.9％nacl，20mmol/l尿素，14μg/ml苯酚红，用hcl调至ph为6.8)，测定其od550的数值。
12、在本专利技术的具体实施方式中，选用多种符合上述条件的益生菌作为示例性说明。
13、在本专利技术的一种实施方式中，所述益生菌为植物乳杆菌cn2018、罗伊氏乳杆菌dsm17648和鼠李糖乳杆菌hn001。植物乳杆菌cn2018、罗伊氏乳杆菌dsm17648和鼠李糖乳杆菌hn001在片剂原料中添加量的活菌数之比优选为2：2：1。
14、在本专利技术的一种实施方式中，所述益生菌为副干酪乳杆菌mp137、动物双歧杆菌乳亚种bb-12和短双歧杆菌m-16v。副干酪乳杆菌mp137、动物双歧杆菌乳亚种bb-12和短双歧杆菌m-16v在片剂原料中添加量的活菌数之比优选为3：3：4。
15、在本专利技术的一种实施方式中，所述益生菌为卷曲乳杆菌ccfm1118、嗜酸乳杆菌ncfm和长双歧杆菌bb536。卷曲乳杆菌ccfm1118、嗜酸乳杆菌ncfm和长双歧杆菌bb536在片剂原料中添加量的活菌数之比优选为3：3：4。
16、在本专利技术的一种实施方式中，所述益生菌为婴儿双歧杆菌r0033、瑞士乳杆菌r0052和两歧双歧杆菌r0071。婴儿双歧杆菌r0033、瑞士乳杆菌r0052和两歧双歧杆菌r0071在片剂原料中添加量的活菌数之比优选为3：3：4。
17、经实验验证，在保证片剂中益生菌的活菌数和死菌数之比在(0.25～4)：1范围内的情况下，以上益生菌复配组合中，各种益生菌及其代谢产物能够很好地协同配合作用，实现较好的抗幽门螺杆菌效果；上述益生菌复配组合作为活性成分配合本专利技术的胃滞留缓释片剂剂型，能够进一步提升抗幽门螺杆菌的效果。...
【技术保护点】
1.一种含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂中，益生菌的活菌数与死菌数之比为(0.25～4)：1；
2.根据权利要求1所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述益生菌对幽门螺杆菌的相对抑菌圈直径≥3.5±0.1cm；
3.根据权利要求1或2所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂中，所述益生菌的活菌数至少为2.0×109CFU/g。
4.根据权利要求1～3任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂在胃内或胃液模拟液中消化30min内的膨胀直径大于人体幽门直径。
5.根据权利要求1～4任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂包含以下重量份的组分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸盐5～30份；
6.根据权利要求1～5任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂包含以下重量份的组分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸盐5～30份，填充剂5～30份，粘合剂0.5～10份，润滑剂0.5～10份，其他辅料0.5～10份；
...【技术特征摘要】
1.一种含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂中，益生菌的活菌数与死菌数之比为(0.25～4)：1；
2.根据权利要求1所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述益生菌对幽门螺杆菌的相对抑菌圈直径≥3.5±0.1cm；
3.根据权利要求1或2所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂中，所述益生菌的活菌数至少为2.0×109cfu/g。
4.根据权利要求1～3任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂在胃内或胃液模拟液中消化30min内的膨胀直径大于人体幽门直径。
5.根据权利要求1～4任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征在于，所述片剂包含以下重量份的组分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸盐5～30份；
6.根据权利要求1～5任一项所述的含益生菌的胃滞留缓释片剂，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄松，宋贝，李腾，
申请(专利权)人：深圳研序微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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