【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于结核分枝杆菌耐药基因突变检测领域，在耐药早期阶段，通过检测超低频突变，实现高危耐药患者监测和耐药结核预警，具体是一种对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、耐药结核病有治愈率低、死亡率高的特点。异质性耐药，是指样本中耐药菌和敏感菌共存，且耐药菌比例≤1％的状态。临床实践中，药物敏感结核患者体内的菌群一旦发生异质性耐药，耐药菌比例往往会逐渐升高并最终成为优势菌，该患者就由药物敏感结核变成耐药结核。因此异质性耐药是耐药结核发生的早期阶段，也是防控干预的关键窗口期。对耐药结核高危病例进行异质性耐药水平动态监测及早期预警，是实现早期干预和控制耐药结核传播的重要手段。异质性耐药阶段，由于耐药菌占比例低，存在检测难度大和定量检测难以实现等困难。
2、传统的表型耐药检测是判断结核耐药的金标准，理论上可检测出耐药比例≥1％的异质性耐药菌群，但实践中一般需5％以上比例才可稳定检出，且存在耗时长和对检测场所有严格的生物安全要求等缺点，难以满足快速检测需求，不利于耐药早期发现和传播防控。随着分子检测技术的...
【技术保护点】
1.对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒，其特征在于包括靶向结核分枝杆菌rpoB耐药突变位点和内参基因的引物及探针，所述内参基因的通道选择了KatG基因的保守区域，设计了上游引物，下游引物和探针序列；靶向结核分枝杆菌rpoB的基因区域设计了特异性突变位点的上游引物序列，通用下游引物和探针序列；所述的特异性突变位点包括rpoBL430P、rpoBH445Y、rpoBH445R、rpoBD435Y、rpoBH445D、rpoBH445L、rpoBS450L和rpoBS450W。
2.根据权利要求1所述的对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒，其特征在于所...
【技术特征摘要】
1.对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒，其特征在于包括靶向结核分枝杆菌rpob耐药突变位点和内参基因的引物及探针，所述内参基因的通道选择了katg基因的保守区域，设计了上游引物，下游引物和探针序列；靶向结核分枝杆菌rpob的基因区域设计了特异性突变位点的上游引物序列，通用下游引物和探针序列；所述的特异性突变位点包括rpobl430p、rpobh445y、rpobh445r、rpobd435y、rpobh445d、rpobh445l、rpobs450l和rpobs450w。
2.根据权利要求1所述的对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒，其特征在于所述特异性突变位点的上游引物序列在3’端倒数第2位或第3位碱基处引入一个错配碱基。
3.根据权利要求2所述的对超低比例利福平耐药突变定量检测的试剂盒，其特征在于还包括数字pcr反应试剂，引物探针对，其中所述数字pcr反应试剂包括pcr缓冲液、taq dna聚合酶、hex染料和无核酸酶水。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：沙巍，王丽，张育杰，罗辉，
申请(专利权)人：上海市肺科医院上海市职业病防治院，
类型：发明
国别省市：
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