一种蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体、重组毕赤酵母及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体、重组巴斯德毕赤酵母及其构建方法和应用，所述蛋白A/G/C激酶Sch9来源于酿酒酵母，所述蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体Sch9<supgt;2D3E</supgt;为蛋白A/G/C激酶Sch9的第723位的苏氨酸突变为天冬氨酸，第726位的甲硫氨酸突变为天冬氨酸，第737位的苏氨酸突变为谷氨酸，第758位的丝氨酸突变为谷氨酸，第765位的丝氨酸突变为谷氨酸。Sch9的突变体Sch9<supgt;2D3E</supgt;(T723D、S726D、T737E、S758E和S765E)，蛋白可自身实现磷酸化，不受上游蛋白调控，可以持续激活其下游作用因子，使翻译速率不受环境影响，对外源蛋白的表达有着潜在的促进作用。有利于巴斯德毕赤酵母作为酶制剂生产菌株的广发应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，特别是涉及一种蛋白a/g/c激酶sch9的突变体、重组毕赤酵母及其构建方法和应用。

技术介绍

1、巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)表达系统是上世纪80年代初期发展起来的一种新型的外源蛋白表达系统，它具有操作简便、易于培养、生长迅速，外源蛋白表达量高、生产成本低等优点。此外，巴斯德毕赤酵母表达系统还可以利用甲醇诱导醇氧化酶来控制外源基因的表达，并且巴斯德毕赤酵母的生长快速，适合于高密度培养，同时巴斯德毕赤酵母作为一种真核细胞生物，可以对翻译后的蛋白进行加工，使来源于真核生物外源蛋白得到正确的折叠和修饰，而巴斯德毕赤酵母表达系统已有20多年的研究开发使用历史，有多种表达载体和改良的宿主菌可供选择，可以进行胞内表达或分泌表达。因此，巴斯德毕赤酵母表达系统的具有很强的实用意义。

2、巴斯德毕赤酵母表达系统广泛地应用于分泌表达来源于人、动物、植物、真菌、细菌及病毒等的重组蛋白。目前已有许多外源基因实现了在巴斯德毕赤酵母的高效分泌表达，表达量能达到克每升的水平。高效表达外源蛋白时，核糖体蛋白的合成会受到抑制，从而减少本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体，其特征在于，所述蛋白A/G/C激酶Sch9来源于酿酒酵母，所述蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体Sch92D3E为蛋白A/G/C激酶Sch9的第723位的苏氨酸突变为天冬氨酸，第726位的甲硫氨酸突变为天冬氨酸，第737位的苏氨酸突变为谷氨酸，第758位的丝氨酸突变为谷氨酸，第765位的丝氨酸突变为谷氨酸。

2.如权利要求1所述的蛋白A/G/C激酶Sch9的突变体，其特征在于，所述突变体Sch92D3E的氨基酸序列如Seq No.2所示。

3.一种重组巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，其特征在于，所述重组...

【技术特征摘要】

1.一种蛋白a/g/c激酶sch9的突变体，其特征在于，所述蛋白a/g/c激酶sch9来源于酿酒酵母，所述蛋白a/g/c激酶sch9的突变体sch92d3e为蛋白a/g/c激酶sch9的第723位的苏氨酸突变为天冬氨酸，第726位的甲硫氨酸突变为天冬氨酸，第737位的苏氨酸突变为谷氨酸，第758位的丝氨酸突变为谷氨酸，第765位的丝氨酸突变为谷氨酸。

2.如权利要求1所述的蛋白a/g/c激酶sch9的突变体，其特征在于，所述突变体sch92d3e的氨基酸序列如seq no.2所示。

3.一种重组巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)，其特征在于，所述重组巴斯德毕赤酵母分泌权利要求1-2任意一项所述的蛋白a/g/c激酶sch9的突变体sch92d3e。

4.如权利要求3所述的巴斯德毕赤酵母，其特征在于，所述重组巴斯德毕赤酵母保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：cgmcc no.26936，保藏日期：2023年...

【专利技术属性】
技术研发人员：李承，姜睿康，薛怡芸，李振，张天元，
申请(专利权)人：苏州聚维元创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：