一种制造技术

本发明专利技术涉及一种

【技术实现步骤摘要】
一种MTHFR基因C677T位点的快速检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种
MTHFR
基因
C677T
位点的快速检测试剂盒及其应用
。

技术介绍

[0002]5,10
‑
亚甲基四氢叶酸还原酶
(MTHFR)
是甲硫氨酸
‑
叶酸代谢中的一个关键酶，该酶将体内的
5,10
‑
亚甲基四氢叶酸还原为5‑
甲基四氢叶酸，同型半胱氨酸在5‑
甲基四氢叶酸以及维生素
B12
的参与下，生成活性甲基，直接提供给体内所需甲基的大分子；正常的
MTHFR
活性对于防止同型半胱氨酸积聚有重要作用，
MTHFR
基因突变造成
MTHFR
活性降低可使同型半胱氨酸转变为甲硫氨酸的过程出现障碍，造成叶酸水平降低以及高同型半胱氨酸血症；
C677T(refSNP
：
rs1801133)
多态性将
MTHFR
基因特定位置的丙氨酸转变为缬氨酸，位于酶活性区域，杂合型携带者酶活性降至
65
％，纯合型降至
30
％；
[0003]研究显示，携带
TT
等位基因型的人群与
CC
基因型或
CT
基因型人群相比较，
TT
基因型与高水平的同型半胱氨酸水平显著相关r/>(
与脑卒中发生呈显著相关性
)
；
TT
型携带者的同型半胱氨酸水平约是
CC
型或
CT
型的两倍；同样与
CC
型比较，
Meta
分析显示
TT
基因型也促进静脉血栓的形成和增加冠心病的发病风险；
《H
型高血压诊断与治疗专家共识
》
提出：
MTHFR 677TT
基因型是冠心病与脑卒中的独立危险因素，有条件的应该进行基因型检测，以帮助对患者进行危险分层；
[0004]此外，
T
等位基因的母亲比
677CC
基因母亲生育
Down
综合征患儿的风险更高；
[0005]因此，
MTHFR
基因
C677T
位点的检测有助于对被检者进行危险度的分层，进行更有针对性的干预，降低疾病或生育畸形的发生率；
[0006]目前，基于普通有机耗材或有机耗材芯片的
qPCR
检测时效较低，主要在于非硅基的微流控芯片的材质限制
qPCR
的升降温速率，从而导致
qPCR
的检测时间较长；另一方面是在于硅基微流控芯片的反应腔体与常规的
qPCR
的反应体系不易适配，即使硅基微流控芯片升温速率较快，但硅基微流控芯片的
qPCR
检测效率仍受到常规的
qPCR
的反应体系的拖累，不少常规的
PCR
反应体系包括酶及反应成分等无法适应快速升降温扩增过程中大幅缩短时间后的热启动变性复性延伸过程；例如：
CN202111130236.3
公开了一种快速聚合酶链式反应用硅基芯片的制造方法，但尚未能针对
MTHFR
基因
C677T
位点实现提出快速检测试剂；因此，基于超快速检测的目标，亟需一种针对
MTHFR
基因
C677T
位点，且适配于硅基微流控芯片的
qPCR
快速检测的试剂盒
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种
MTHFR
基因
C677T
位点的快速检测试剂盒及其应用
。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0009]本专利技术的第一方面是提供一种
MTHFR
基因
C677T
位点的快速检测试剂盒，包括：引
物组以及探针组；其中，
[0010]所述引物组包括：核苷酸序列为
ACCTGAAGCACTTGAAGGAGAA(SEQ ID NO
：
1)
的引物
rs1801133
‑
yF
以及核苷酸序列为
CTCAAAGAAAAGCTGCG TGAT(SEQ ID NO
：
2)
的引物
rs1801133
‑
yR
；
[0011]所述探针组包括：核苷酸序列为
TGAAATCGGCTCCCG(SEQ ID NO
：
3)
的探针
rs1801133
‑
yFAMTaq4
以及核苷酸序列为
TGAAATCGACTCCCGC(SEQ ID NO
：
4)
的探针
rs1801133
‑
yVICTaq。
[0012]优选地，所述探针标记有荧光基团和
/
或淬灭基团
。
[0013]优选地，所述荧光基团为
FAM
和
/
或
VIC。
[0014]优选地，所述淬灭基团为
MGB。
[0015]优选地，还包括：缓冲液
、dNTP、DNA
聚合酶以及水
。
[0016]优选地，所述缓冲液包括：摩尔浓度为
500mmol/L
‑
750mmol/L
的
Tris
盐
、
摩尔浓度为
20mmol/L
‑
40mmol/L
的
MgCl2、
摩尔浓度为
500mmol/L
的
KCl、
质量体积分数
(m/v)
为
30
％
‑
40
％的海藻糖
、
体积分数
(v/v)
为
0.1
％的
Tween 20、
体积分数
(v/v)
为
0.2
％的
Triton 100、
摩尔浓度为
25mmol/L
‑
50mmol/L
的
DTT、
质量浓度为
10mg/mL
的
BSA
以及
DEPC dH2O。
[0017]优选地，所述缓冲液的
pH
值为
8.90
‑
9.20。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
MTHFR
基因
C677T
位点的快速检测试剂盒，其特征在于，包括：引物组以及探针组；其中，所述引物组包括：核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1‑2所示的引物；所述探针组包括：核苷酸序列如
SEQ ID NO
：3‑4所示的探针
。2.
根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述探针标记有荧光基团和
/
或淬灭基团
。3.
根据权利要求2所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为
FAM
和
/
或
VIC。4.
根据权利要求2所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述淬灭基团为
MGB。5.
根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，还包括：缓冲液
、dNTP、DNA
聚合酶以及水
。6.
根据权利要求5所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括：摩尔浓度为
500mmol/L
‑
750mmol/L
的
Tris
盐
、
摩尔浓度为
20mmol/L
‑
40mmol/L
的
MgCl2、
摩尔浓度为
500mmol/L
的
KCl、
质量体积分数为
30
％
‑
40
％的海藻糖
、
体积分数为
0.1
％的
Tween 20、
体积分数为
0.2
％的
Triton 100、
摩尔浓度为
25mmol/L
‑
50mmol/L
的
DTT、
质量浓度为
10mg/mL
...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢毅，朱建伟，曹金城，
申请(专利权)人：联合基因生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：