miR9474制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其涉及

【技术实现步骤摘要】
miR9474调控植物抗坏血酸积累的应用及方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用
。

技术介绍

[0002]番茄是一种在全世界范围内广泛种植的大宗蔬菜，具有营养丰富
、
食用方式繁多等特点，深受消费者喜爱
。
虽然现今市场上番茄品种众多，但在人们驯化野生番茄的漫长过程中，人们更多关注产量
、
货架期
、
耐储运等性状，而忽视了番茄果实的营养品质
。
维生素
C(VC)
，又名抗坏血酸
(L
‑
ascorbic acid
，
AsA)
，其不仅是人体中不可或缺的一种营养元素，而且在植物逆境响应
、
生长发育
、
生理代谢等过程中行使重要的功能，
AsA
也是番茄果实中一种重要的营养物质
。
另外，由于人类无法通过自身合成维生素
C
，只能从蔬菜
、
水果中获取
。
因此，研究番茄维生素
C
合成代谢机制具有重要意义
。
[0003]迄今为止，在植物中已经鉴定了4条抗坏血酸合成途径，分别为
D
‑
甘露糖
/L
‑
半乳糖合成
(D
‑
Man/L
‑
Gal)/>途径
、
半乳糖醛酸途径
、
古洛糖途径与肌醇途径；其中，各途径参与维生素
C
合成与代谢关键酶基因包括有编码
GDP
‑
甘露糖焦磷酸化酶的基因
SlGMP、
编码
GDP
‑
甘露糖
‑3’
,5
’‑
表型异构酶的基因
SlGME、
编码
GDP
‑
L
‑
半乳糖磷酸化酶的基因
SlGGP、
编码
L
‑
半乳糖脱氢酶的基因
SlGalDH、
编码
L
‑
半乳糖
‑
1,4
‑
内酯脱氢酶
SlGLDH
和编码半乳糖醛酸还原酶的基因
SlGalUR。
虽然现有的科学研究对抗坏血酸生物合成代谢途径的研究较多，但有关植物调控抗坏血酸生物合成代谢的报道较少，并且已报道的研究多是转录因子在转录水平调控机制方面的研究，在非编码
RNA
对植物抗坏血酸合成代谢的调控作用研究较少
。
[0004]生物基因的表达通常受到多种调控因子共同控制，非编码
RNA(non
‑
coding RNA
，
ncRNA)
是其中非常重要的一种反向调控因子，它广泛存在于各种植物中，通过转录后调控或者转录抑制等方式调控靶基因的表达
。
目前已经发现的
ncRNA
有多种形式，主要包括
siRNA(small interference RNA
，
siRNA)、microRNA(miRNA)
和长链非编码
RNA(long non
‑
coding RNA
，
lncRNA)。miRNA
是当前植物小分子
RNA
的研究热点，其是由具有发夹结构的
miRNA
基因前体经过
Dicer
酶加工后生成长度在
19
‑
25bp
的植物內源非编码
RNA
，在植物非生物抗性和生长发育中的研究已经有相当多的报道
。
但是，目前还未见
miRNA
在调控植物
AsA
积累的相关报道
。
因此，研究植物
miRNA
的功能与
AsA
合成的关系可为番茄抗坏血酸生物合成调控机制提供新的理论依据，也可为改善果实品质等农艺性状方面提供新的育种方向
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用，并提供了以该
miRNA
为靶点的调控植物抗坏血酸积累的方法，目的在于解决或至少部分解决现有技术中的问题
。
[0006]本专利技术具体通过以下技术方案实现：
[0007]本专利技术的第一方面提供了
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用
。
[0008]进一步地，所述
miR9474
包括
miR9474
‑
3p
和
/
或
miR9474
‑
5p
；所述
miR9474
‑
3p
的核
苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示，所述
miR9474
‑
5p
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0009]更进一步地，所述
miR9474
前体的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0010]进一步地，所述植物为番茄
。
[0011]本专利技术的第二方面提供了一种调控植物抗坏血酸积累的方法，包括以下步骤：调控植物体内
miR9474
的表达量，所述调控植物抗坏血酸积累包括正调控植物抗坏血酸积累和负调控植物抗坏血酸积累
。
[0012]进一步地，通过降低
miR9474
的表达量，实现正调控所述植物抗坏血酸积累；通过增强
miR9474
的表达量，实现负调控所述植物抗坏血酸积累
。
[0013]进一步地，通过降低
miR9474
的表达量，实现正调控所述植物抗坏血酸积累，包括以下步骤：构建
miR9474
沉默表达或基因敲除载体，转化野生型植物，培养获得
miR9474
低表达或不表达的转基因植物
。
[0014]进一步地，通过增强
miR9474
的表达量，实现负调控所述植物抗坏血酸积累，包括以下步骤：构建
miR9474
超量表达载体，转化野生型植物，培养获得
miR9474
过表达的转基因植物
。
[0015]进一步地，所述
miR9474
超量表达载体的构建方法包括：将<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用
。2.
根据权利要求1所述的
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用，其特征在于，所述
miR9474
包括
miR9474
‑
3p
和
/
或
miR9474
‑
5p
；所述
miR9474
‑
3p
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示，所述
miR9474
‑
5p
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。3.
根据权利要求1所述的
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用，其特征在于，所述
miR9474
前体的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。4.
根据权利要求1‑3任一项所述的
miR9474
调控植物抗坏血酸积累的应用，其特征在于，所述植物为番茄
。5.
一种调控植物抗坏血酸积累的方法，其特征在于，包括以下步骤：调控植物体内
miR9474
的表达量，所述调控植物抗坏血酸积累包括正调控植物抗坏血酸积累和负调控植物抗坏血酸积累
。6.
根据权利要求5所述的调控植物抗坏血酸积累的方法，其特征在于，通过降低
miR9474
的表达量，实现正调控所述植物抗坏血...

【专利技术属性】
技术研发人员：张余洋，朱立辉，叶志彪，卢永恩，叶杰，欧阳波，王昕，郑伟，
申请(专利权)人：湖北洪山实验室，
类型：发明
国别省市：