基于制造技术

本发明专利技术公开了一种基于

【技术实现步骤摘要】
基于Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)磁分离和纳米酶催化食源性致病菌比色检测方法


[0001]本专利技术属于食品安全
，涉及纳米技术和生物技术
。
具体地，尤其涉及一种基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测的方法，其利用磁性
MOF
的磁分离特性和纳米酶活性原理来高灵敏度检测食源性致病菌
。

技术介绍

[0002]食品是人类赖以生存的物质基础，食品安全问题是国际社会十分关注的问题
。
其中，由食源性致病菌引起的疾病已成为食品安全领域中最严重的问题，引起了研究人员的广泛关注
。
因此开发准确
、
高效
、
快速的食品样品中食源性致病菌检测方法显得至关重要
。
但是由于食品基质的复杂性，要有效分离富集和准确检测单增李斯特菌是颇具挑战性的
。
近年来，磁性材料发展迅速，被广泛应用于生物学
、
医学等领域
。
其中，磁性
Fe3O4颗粒具有优异的超顺磁性，可用于目标物质的分离富集等领域；金属有机框架
(MOFs)
材料，是一种多孔配位聚合物，由金属离子团簇和有机配体两部分组成
。
与传统的多孔材料相比，
MOFs
具有高体积吸附能力
、
巨大的比表面积
、
有效的负载能力和优异的催化特性，在吸附
、
分离
、
催化和药物输送等相关领域得到研究和应用
。
[0003]免疫磁分离技术利用磁性材料的磁响应性和生物兼容性，实现对致病菌精准
、
快速的分离和富集，在复杂食品样品的预处理中得到了深入研究
。
而生物传感器技术以检测时间短和灵敏度高等优点被广泛应用到食品安全检测领域
。
因此，结合磁分离技术和生物传感器技术，旨在构建基于
Fe3O4@MOFs
磁分离的单增李斯特菌快速检测方法，为净化食品基质和富集微量目标提供了新的选择，为发展高灵敏度和高效率的食品安全检测新技术提供了新的方向
。
由鉴于此，特提出本专利技术
。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测方法，该检测方法具有检测灵敏度高，特异性强等特点
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测方法，包括如下步骤：
[0007]a)
将
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
用超纯水洗涤并重悬于超纯水中，加入适配体后于室温下震荡一段时间，超纯水洗涤后磁分离去上清，获得
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体作为催化探针，于
4℃
保存；
[0008]b)
将步骤
a)
制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体加入牛血清蛋白溶液，室温下封闭一段时间，超纯水洗涤，磁分离去上清获得
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体
@BSA
作为捕获探针，于
4℃
保存；
[0009]c)
将不同浓度梯度的食源性致病菌与步骤
b)
制备所得捕获探针
Fe3O4@MIL
‑
100
(Fe)@
适配体
@BSA
置于室温下反应
30
‑
50min
后，磁分离弃去上清，超纯水洗涤，再加入步骤
a)
制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体，室温下偶联
30
‑
50min
，磁分离去上清并重悬于超纯水中，再加入
TMB
和稀盐酸混合，于室温反应5‑
15min
，磁分离并检测上清液的紫外吸收强度；以紫外吸收强度为纵坐标，以食源性致病菌浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0010]d)
将待测样品与步骤
b)
制备所得捕获探针磁性
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体
@BSA
置于室温下反应
30
‑
50min
后，磁分离弃去上清，超纯水洗涤，再加入步骤
a)
中制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体，室温下偶联
30
‑
50min
，磁分离去上清并重悬于超纯水中，再加入
TMB
和稀盐酸混合，于室温反应5‑
15min
，磁分离并检测上清液的紫外吸收强度；代入标准曲线，计算得出待测样品中的菌浓度
。
[0011]进一步，所述步骤
a)
中，
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
的制备方法如下：在
Fe3O4的水分散液中，加入
1,3,5
‑
苯三甲酸混合均匀，超声5‑
15min
，转移至反应釜中
110
‑
140℃
反应
12
‑
18h
，冷却至室温，经洗涤
、
干燥，得到
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
粉末
。
[0012]进一步，在含
0.2g Fe3O4的水分散液中，加入
0.30
‑
0.50g
的
1,3,5
‑
苯三甲酸
。
[0013]进一步，所述
Fe3O4经下述处理获得：将乙二醇与六水三氯化铁
、
无水乙酸钠
、
二水合柠檬酸钠混合均匀，然后在
180
‑
220℃
下加热反应
10
‑
14h
，冷却至室温，经洗涤
、
干燥，即得，具体为在
220
‑
260mL
乙二醇中加入8‑
10g
六水氯化铁
、14<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
a
）将
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
用超纯水洗涤并重悬于超纯水中，加入适配体后于室温下震荡一段时间，超纯水洗涤后磁分离去上清，获得
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体作为催化探针，于
4℃
保存；
b
）将步骤
a
）制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体加入牛血清蛋白溶液，室温下封闭一段时间，超纯水洗涤，磁分离去上清获得
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体
@BSA
作为捕获探针，于
4℃
保存；
c
）将不同浓度梯度的食源性致病菌与步骤
b
）制备所得捕获探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体
@BSA
置于室温下反应
30
‑
50min
后，磁分离弃去上清，超纯水洗涤，再加入步骤
a
）制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体，室温下偶联
30
‑
50min
，磁分离去上清并重悬于超纯水中，再加入
TMB
和稀盐酸混合，于室温反应5‑
15min
，磁分离并检测上清液的紫外吸收强度；以紫外吸收强度为纵坐标，以食源性致病菌浓度为横坐标，绘制标准曲线；
d
）将待测样品与步骤
b
）制备所得捕获探针磁性
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体
@BSA
置于室温下反应
30
‑
50min
后，磁分离弃去上清，超纯水洗涤，再加入步骤
a
）中制备所得催化探针
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)@
适配体，室温下偶联
30
‑
50min
，磁分离去上清并重悬于超纯水中，再加入
TMB
和稀盐酸混合，于室温反应5‑
15min
，磁分离并检测上清液的紫外吸收强度；代入标准曲线，计算得出待测样品中的菌浓度
。2.
根据权利要求1所述的基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测方法，其特征在于，所述步骤
a
）中，
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
的制备方法如下：在
Fe3O4的水分散液中，加入
1,3,5
‑
苯三甲酸混合均匀，超声5‑
15min
，转移至反应釜中
110
‑
140℃
反应
12
‑
18 h
，冷却至室温，经洗涤
、
干燥，得到
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
粉末
。3.
根据权利要求2所述的基于
Fe3O4@MIL
‑
100(Fe)
磁分离和纳米酶催化的食源性致病菌比色检测方法，其特征在于，在含
0.2g Fe3O4的水分散液中，加入
0.30
‑
0.50 g
的
1,3,5
‑
苯三甲酸
。...

【专利技术属性】
技术研发人员：白艳红，杜娟，李可，赵电波，相启森，栗俊广，刘楷，郭姜里，李宗双，
申请(专利权)人：郑州轻工业大学，
类型：发明
国别省市：