【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组连接酶组合物及其用途
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求
2021
年4月5日提交的标题为“Ligases and Uses Thereof”的美国临时申请号
63/171,031
和
2021
年
11
月
19
日提交的标题为“Recombinant Ligase Composition and Uses Thereof”的美国临时申请号
63/281,608
的优先权和权益，这些临时申请的全部公开内容出于所有目的以引用的方式并入本文
。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已以
ASCII
格式以电子方式提交并通过引用整体并入本文
。
所述
ASCII
副本创建于
2022
年4月4日，名为
10416_070WO1_SL.txt
，大小为
23,956
字节
。
>[0005]本公开本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种重组连接酶组合物，所述重组连接酶组合物包含：自刺胞虫小球藻病毒
1(ATCV
‑
1)
分离出的重组产生的连接酶，所述连接酶与至少一个多核苷酸结合多肽融合
。2.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，其中与至少一个多核苷酸结合多肽融合的
ATCV
‑1连接酶包含与
SEQ ID NO
：1至少
90
％相同
、
与
SEQ ID NO
：1至少
95
％相同或与
SEQ ID NO
：1至少
99
％相同的连接酶氨基酸序列
。3.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，其中所述至少一个多核苷酸结合多肽为
DNA
结合多肽或
RNA
结合多肽
。4.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，其中所述多核苷酸结合多肽为
HU
蛋白或其功能变体或功能片段
。5.
根据权利要求4所述的重组连接酶组合物，其中所述
HU
蛋白具有与
SEQ ID NO
：7至少
90
％相同
、
与
SEQ ID NO
：2至少
95
％相同或与
SEQ ID NO
：7至少
99
％相同的氨基酸序列
。6.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，其中所述重组产生的连接酶具有与
SEQ ID NO
：8至少
90
％相同
、
与
SEQ ID NO
：8至少
95
％相同或与
SEQ ID NO
：8至少
99
％相同的核苷酸序列
。7.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，其中所述重组产生的连接酶具有与
SEQ ID NO
：9至少
90
％相同
、
与
SEQ ID NO
：9至少
95
％相同或与
SEQ ID NO
：9至少
99
％相同的氨基酸序列
。8.
根据权利要求1所述的重组连接酶组合物，所述重组连接酶组合物还包含标记
。9.
根据权利要求8所述的重组连接酶组合物，其中所述标记附接到所述重组产生的连接酶
。10.
根据权利要求8所述的重组连接酶组合物，其中所述标记为可检测标记
。11.
根据权利要求
10
所述的重组连接酶组合物，其中所述可检测标记为荧光标记或同位素标记
。12.
根据权利要求8所述的重组连接酶组合物，其中所述标记为纯化标记
。13.
根据权利要求
12
所述的重组连接酶组合物，其中所述纯化标记为选自聚组氨酸标签
、
链霉亲和素标签
、
生物素标签和肽标签的标签
。14.
一种使用根据权利要求1‑
13
中任一项所述的重组连接酶组合物将双链
DNA
或单链
DNA
连接在一起以完成连接的方法
。15.
一种将
DNA
多核苷酸探针连接在一起的方法，所述方法包括：
(a)
提供核酸模板；
(b)
使至少两个
DNA
多核苷酸探针与所述核酸模板杂交；以及
(c)
使用根据权利要求1‑
13
中任一项所述的重组连接酶组合物将所述至少两个
DNA
多核苷酸探针彼此连接
。16.
根据权利要求
15
所述的方法，其中所述核酸模板包含剪接衔接点
。17.
根据权利要求
16
所述的方法，其中所述
DNA
多核苷酸探针的至少一部分在与所述核酸模板的所述剪接衔接点处具有互补区域
。18.
根据权利要求
15
所述的方法，其中所述核酸模板为
RNA
模板
。19.
根据权利要求
15
所述的方法，其中所述两个
DNA
多核苷酸探针被允许连接以形成单
个多核苷酸
。20.
根据权利要求
15
所述的方法，其中所述连接在含有至少1μ
M
‑
1.5mM ATP
的缓冲液中进行
。21.
根据权利要求
15
所述的方法，其中连接步骤还包括温育有效实现所述
DNA
多核苷酸探针的至少
70
％
‑
90
％连接的时间段
。22.
一种检测
RNA
序列的方法，所述方法包括：
(a)
将在连接衔接点处具有互补区域的多核苷酸退火至
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