拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术提供了一种拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌

【技术实现步骤摘要】
拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌、筛选方法及应用


[0001]本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种拮抗雪茄烟叶霉烂病菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌
、
筛选方法及应用
。

技术介绍

[0002]雪茄烟晾制过程中经常出现霉变现象
。
目前烟草在调制期的霉烂病变问题每年在不同的晾烟区都较为严重，在雪茄烟晾制过程中也是如此，因此也极大制约着晾烟产区的发展
。
烟叶霉变是由微生物引起的，而在霉变烟叶中主要是由不同真菌共同引起的
。
霉变烟叶的真菌群落主要包括曲霉属
(Aspergillus)、
青霉属
(Penicillium)、
耐干霉菌属
(Xeromyces)、
根霉属
(Rhizopus)
和毛霉属
(Muor)
等霉变微生物
。
针对霉变防治包括物理防治
、
化学防治和生物防治等
。
物理防治效果易受天气的影响防治效果较差，化学防治又因其安全性引起到雪茄客的担心，连年使用会使霉烂病菌抗药性增强
。
生物防治是以生物或生物代谢物产物来治理有害生物，有抗生素
、
天敌
、
生物农药等，具有无农残
、
药效长等优点，十分符合当今社会对无污染
、
无公害产品的要求
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种拮抗雪茄烟叶霉烂病菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌
、
筛选方法及应用；利用生物防治的办法解决雪茄烟叶晾制过程中真菌性病害
。
[0004]本专利技术的技术方案是，一种拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌，该菌株为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)DSJ3
，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC NO
：
27208。
[0005]进一步地，该菌株
28℃
条件下在
LB
平板上为圆形
、
乳黄色
、
凸起
、
边缘光滑
、
不透明
、
有光泽
、
菌落粘稠
。
[0006]本专利技术还涉及一种微生物药剂，其含有的有效成分为所述贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillusvelezensis)DSJ3、
或其发酵物
、
或其代谢物中的一种或几种
。
一种菌剂，含有所述贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)DSJ3、
或其发酵物
、
或其代谢物中的一种或几种
。
[0007]本专利技术还涉及一种生物肥料，其含有所述贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)DSJ3、
或其发酵物
、
或其代谢物中的一种或几种
。
[0008]本专利技术还涉及所述贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)DSJ3、
微生物药剂或生物肥料在拮抗琉球曲霉中的应用
。
[0009]进一步地，所述琉球曲霉来源于雪茄霉烂病原菌
。
[0010]上述贝莱斯芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0011]步骤一，称取晾制阶段霉变烟叶未霉变部位，无菌操作接入盛有无菌生理盐水的锥形瓶中，震荡得到原始菌悬液；
[0012]步骤二，将原始菌悬液进行梯度稀释后涂布于
LB
平板培养基，在
28℃
条件下培养2天，将长出的菌落纯化得到单一的菌落；
[0013]步骤三，将所述步骤二分离纯化的菌株和烟叶叶面霉烂病菌琉球曲霉采用平板对峙法接种在
PDA
平板上进行培养，将分离纯化的菌株接种至霉菌菌饼
2cm
处，菌株划线长度
2cm。
根据琉球曲霉生长的形态和
R
值
(R
＝霉菌菌落向拮抗菌株生长的距离
/
对照菌落半径
)
判断菌株是否有拮抗作用，对有拮抗作用的菌株进行分类鉴定，即得到拮抗菌株
。
[0014]本专利技术具有以下有益效果：
[0015]本专利技术提供的所述拮抗菌株能有效抑制雪茄烟叶霉烂病菌琉球曲霉的生长；本专利技术对筛选得到的所述拮抗菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌，为防治雪茄晾制期间叶面霉烂提供了新的选择
。
附图说明
[0016]图1是从雪茄霉烂病烟叶分离得到的霉菌的照片
。
[0017]图2是琉球曲霉属的系统发育树
。
[0018]图3是梗1的青霉属的系统发育树
。
[0019]图4是梗2的另一青霉属的系统发育树
。
[0020]图5是本专利技术拮抗菌株与雪茄烟叶叶面霉烂病菌琉球曲霉的拮抗对比图
。
[0021]图6是本专利技术提供的拮抗菌株在
LB
固体培养基的菌落形态图
。
具体实施方式
[0022]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围
。
[0023]本专利技术对雪茄烟叶叶面霉烂病霉菌的分离，将霉菌生长的烟叶样品置于超净工作台中，用接种环挑取烟叶上的霉菌于
PDA
固体培养基中，在
28℃
恒温培养观察
。
待长出菌落后，并用接种环挑取霉菌接种到
PDA
中做有规则的划线，经过多次划线得到纯种3株单菌株，如图1所示
。
[0024]经霉菌的的形态学观察
、
显微镜观察
、
生理生化鉴定
、
分子生物学鉴定，一株为琉球曲霉属
、
另外两株为青霉属
。
系统发育树如图2～图4所示，其中叶片上对应的为图2的琉球曲霉，梗
1、
梗2分别对应图
3、
图4的青霉属
。
[0025]本专利技术提供一种拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌，该菌株为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis DSJ3)
，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC NO
：
27208。
[0026]为描述方便，以下将本专利技术提供的拮抗菌株命名为
DSJ3。
本领域技术人员可以理解的是，以下实施例中的
DSJ3
菌株与所述拮抗菌株为同一菌株
。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种拮抗雪茄霉烂病原菌琉球曲霉的贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于：该菌株为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis) DSJ3
，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC NO
：
27208。2.
根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于：该菌株
28℃
条件下在
LB
平板上为圆形
、
乳黄色
、
凸起
、
边缘光滑
、
不透明
、
有光泽
、
菌落粘稠
。3. 一种微生物药剂，其特征在于，其含有的有效成分为权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志豪，袁跃斌，高加明，邓帅军，王倩，赵刚，虞昕磊，周绍桢，覃建华，陈霓，貊志杰，刘兴鑫，
申请(专利权)人：湖北省烟草公司宜昌市公司，
类型：发明
国别省市：