促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物，包括淫羊藿苷

【技术实现步骤摘要】
促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物、培养基及方法


[0001]本专利技术涉及干细胞诱导分化
，尤其涉及促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物
、
培养基及方法
。

技术介绍

[0002]神经系统疾病是全球致死及致残的主要原因之一，给病人和家庭带来巨大痛苦并造成沉重的全球健康负担
,
神经系统疾病包括卒中
、
脑炎
、
偏头疼和阿尔茨海默症等
15
种以上，且目前大多数缺乏有效性治疗措施，其治疗难点在于神经细胞具有不可再生性，而这类疾病是由于中枢神经的不可逆损伤造成
。
目前对受损的神经系统进行修复和再生的研究方法主要为注射神经生长因子和移植神经干细胞，神经干细胞在疾病
、
损伤状态下具有增殖
、
迁移，并向神经细胞
、
星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点
。
[0003]体外获得神经干细胞的主要途径为多能干细胞诱导而来，由于多能干细胞具有分化为三胚层细胞的潜能，尤其是在神经干细胞分化方面，其分化效率和分化后细胞的功能远超过其它种类细胞
。
[0004]目前将多能干细胞诱导成神经干细胞最广泛使用的方法有两种：
[0005]第一种为两步法，首先将多能干细胞形成拟胚体，再进一步诱导为神经干细胞，该方法的缺点在于操作繁琐
、
分化效率低，细胞分化不同步
、
分化的细胞纯度不高；
[0006]第二种为单层细胞通过在诱导培养基添加影响细胞信号通路的生长因子或蛋白质信号途径拮抗剂等，通过不同成分的诱导培养基和培养程序使各作用成分在不同阶段产生作用，从而诱导多能干细胞向神经干细胞定向分化
。
该方法操作简便，无需使细胞形成拟胚体的中间步骤，且分化细胞纯度高，但影响该诱导方法的分化效率的关键因素为培养基中添加成分
、
作用时间等
。
此外，目前现有技术还存在以下不足：对起始细胞状态要求高，依赖于饲养层细胞和不确定性培养因子如血清
、
动物源性细胞因子
、
激素等，制约了神经干细胞在临床上的使用
。
[0007]中药是我国的国粹，具有多靶点
、
多环节
、
多途径的治疗特点，在促进神经再生方面具有独特优势和广阔前景
。
近年来药理学研究表明中药可通过调控胞外信号通路影响胞内转录因子以及改变神经发生微环境等多种途径间接或直接调控神经干细胞的增殖和分化，目前已证实的促进神经发生功效的中药包含多种补益类
、
活血化瘀类
、
化痰类
、
清热类及其有效成分
。
虽然有关中药及其有效成分调控神经干细胞分化已有大量研究报道，但仍存在以下问题：使用成分
、
结构不明确的中药粗提物导致可靠性和可重复性差；目前报道的中药及有效成分方法仍需联合多种细胞因子
、
动物源或人源不明确成分蛋白等，亦或在分化效率及细胞活力方面存在不足；此外，诱导分化周期长，大多在
10
天以上
。
因此，急需开发一种安全
、
高效
、
稳定的诱导方法，以克服现有技术的不足
。

技术实现思路

[0008]本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物，其成分可靠，结构明确，得到的神经干细胞无毒副作用
、
更安全
。
[0009]本专利技术还要解决的技术问题在于，提供一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基，其无血清无动物源成分
、
无饲养层细胞，得到的神经干细胞无毒副作用
、
更安全
。
[0010]本专利技术还要解决的技术问题在于，提供一种多能干细胞向神经干细胞分化的方法，其适用性广，能够将单层人多能干细胞高效
、
快速地诱导分化为神经干细胞
。
[0011]为了解决上述技术问题，一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物，包括淫羊藿苷
、
蛇床子素和白藜芦醇；
[0012]其中，所述淫羊藿苷的添加浓度为1～
20
μ
g/mL
；所述蛇床子素的添加浓度为
0.2
～
10
μ
g/mL
；所述白藜芦醇的添加浓度为
0.1
～5μ
g/mL。
[0013]在一种实施方式中，所述淫羊藿苷的添加浓度为5～
15
μ
g/mL
；所述蛇床子素的添加浓度为2～8μ
g/mL
；所述白藜芦醇的添加浓度为1～3μ
g/mL
；
[0014]所述的淫羊藿苷为淫羊藿提取物；所述蛇床子素为蛇床子提取物；所述白藜芦醇为花生
、
葡萄
、
虎杖或桑椹提取物中的天然多酚类物质
。
[0015]优选地，所述淫羊藿苷的添加浓度为
10
μ
g/mL
；所述蛇床子素的添加浓度为5μ
g/mL
；所述白藜芦醇的添加浓度为2μ
g/mL
；
[0016]相应地，本专利技术提供了所述促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物在制备促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基中的应用
。
[0017]为解决上述问题，本专利技术提供了一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基，包括上述的中药组合物和基础培养基，所述基础培养基包括
DMEM/F12、
维生素
A、
抗坏血酸
、
核黄素
、DL
‑
α
‑
生育酚
、
转铁蛋白
、D
半乳糖
、L
‑
谷氨酰胺
、
硫辛酸
、
腐胺和亚硒酸钠
。
[0018]在一种实施方式中，所述基础培养基包括
DMEM/F12、0.1
～
0.5
μ
M
维生素
A、0.05
～
0.15mM
抗坏血酸
、175
～
190
μ
M
的核黄素
、1
～3μ
M DL
‑
α
‑
生育酚
、0.01
～
0.15
μ
M
转铁蛋白
、10
～
20
μ
g/ml D
半乳糖
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物，其特征在于，包括淫羊藿苷
、
蛇床子素和白藜芦醇；其中，所述淫羊藿苷的添加浓度为1～
20
μ
g/mL
；所述蛇床子素的添加浓度为
0.2
～
10
μ
g/mL
；所述白藜芦醇的添加浓度为
0.1
～5μ
g/mL。2.
如权利要求1促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物，其特征在于，所述淫羊藿苷的添加浓度为5～
15
μ
g/mL
；所述蛇床子素的添加浓度为2～8μ
g/mL
；所述白藜芦醇的添加浓度为1～3μ
g/mL
；所述的淫羊藿苷为淫羊藿提取物；所述蛇床子素为蛇床子提取物；所述白藜芦醇为花生
、
葡萄
、
虎杖或桑椹提取物中的天然多酚类物质
。3.
如权利要求1或2所述的促进多能干细胞向神经干细胞分化的中药组合物在制备促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基中的应用
。4.
一种促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基，其特征在于，包括如权利要求1所述的中药组合物和基础培养基，所述基础培养基包括
DMEM/F12、
维生素
A、
抗坏血酸
、
核黄素
、DL
‑
α
‑
生育酚
、
转铁蛋白
、D
半乳糖
、L
‑
谷氨酰胺
、
硫辛酸
、
腐胺和亚硒酸钠
。5.
如权利要求4所述的促进多能干细胞向神经干细胞分化的培养基，其特征在于，所述基础培养基包括
DMEM/F12、0.1
～
0.5
μ
M
维生素
A、0.05
～
0.15mM
抗坏血酸
、175
～
190
μ
M
的核黄素
、1
～3μ
M DL
‑
α
‑
生育酚
、0.01
～
0.15
μ
M
转铁蛋白
、10
～
20
μ
g/ml D
半乳糖
、1
～
3mM L
‑
谷氨酰胺
、5
～
6mM
硫辛酸
、175
～
190
μ
M
腐胺和
0.05
～
1.5
μ

【专利技术属性】
技术研发人员：江涛，彭特，邓智敏，余玉英，
申请(专利权)人：广东为象生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：