突变型制造技术

本发明专利技术提供了一种突变型

【技术实现步骤摘要】
突变型MMLV逆转录酶、编码基因、表达载体、宿主菌及其应用


[0001]本专利技术专利涉及一种突变型
MMLV
逆转录酶
、
编码基因
、
表达载体
、
宿主菌及其应用，属于生物

。

技术介绍

[0002]逆转录酶
(Reverse transcriptase)
，是以
RNA
为模板合成
DNA
的聚合酶的统称，是科学研究和医学检验分析中常用的工具酶，在现代生物
发挥着重要作用，被广泛应用于转录组分析
、
病原体检测等各种场景
。
迄今为止，发现的逆转录酶有数十种，常用的逆转录酶有来自莫洛尼鼠白血病病毒
(Moloney murine leukemia virus
，
MMLV)
的逆转录酶
、
来自人类免疫缺陷病毒
(Human immunodeficiency virus
，
HIV)1
型的逆转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于在氨基酸序列
SEQ ID No.1
所示的野生型
MMLV
逆转录酶进行突变以降低其
DDDP
活性，所述突变型
MMLV
逆转录酶的
DDDP
活性在野生型
MMLV
逆转录酶的
DDDP
活性的
30
％以下
。2.
根据权利要求1所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于所述突变型
MMLV
逆转录酶具有
RDDP
活性，且
RNase H
活性缺失
。3.
根据权利要求1或2所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于所述突变型
MMLV
逆转录酶还具有以下一个或至少两个特性的提高：热稳定性
、
灵敏度
、RT
‑
qPCR
或
RT
‑
LAMP
中与其他聚合酶的兼容性
。4.
根据权利要求1所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于突变位点包括以下位点中的至少一个：
E7、K120、P141、G178、L217、D224、P297、C310、D361、L362、T382、H438、Q461、E489、A536、E562、Q568、R657
，且与野生型
MMLV
逆转录酶的氨基酸序列一致性在
90
％以上
。5.
根据权利要求3或4所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于突变位点包括
K120、G178、L217、Q461、A536、Q568
中任意一种或至少两种的组合
。6.
根据权利要求3或4所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于突变位点还包括以下位点中的至少一个：
T24、M39、S56、S60、M66、P100、P111、P127、L139、K152、E176、M177、F199、D200、A259、T287、T306、G308、F309、T330、L333、W388、D449、L452、S453、T458、H459、N479、L491、A502、H503、G504、D524、H594、L603、L604、T605、S606、E607、G608、I611、D615、H634、I661、T662、L671。7.
根据权利要求3或4所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于包括以下突变中的至少一个：
E7A
或
E7G、K120D
或
K120E、P141L、G178C、L217P、D224G、P297S、C310Y、D361G、L362P、T382A、H438R
或
H438K、Q461R
或
Q461K、E489G、A536T、E562G、Q568R
或
Q568K、R657C
，且与野生型
MMLV
逆转录酶的氨基酸序列一致性在
90
％以上
。8.
根据权利要求6所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于包括以下突变中的至少一个：
T24A、M39V、S56A、S60R、M66L、P100A、P111L、P127S、L139P、K152D
或
K152E、E176S、M177I、F199L、D200N
或
D200H、A259T、T287A、T306A、G308D、F309S、T330P、L333P、W388R、D449G
或
D449S、L452C、S453R、T458A、H459R
或
H459K、N479D、L491P、A502V、H503R
或
H503K、G504S、D524A、H594K、L603W、L604D
或
L604N
或
L604Y、T605I
或
T605V
或
T605F、S606F
或
S606H
或
S606Y
或
S606L、E607G、G608S、I611R、D615G、H634Y、I661T、T662A、L671P。9.
根据权利要求1所述的突变型
MMLV
逆转录酶，其特征在于所述突变型
MMLV
逆转录酶包括以下组合位点突变中的至少一个：
(1)L139P/K...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘想，商曰朋，朱思思，刘峰，阳瑜红，刘娜，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：