一株蜡样芽孢杆菌菌株制造技术

本发明专利技术涉及一株蜡样芽孢杆菌菌株

【技术实现步骤摘要】
一株蜡样芽孢杆菌菌株Y9及其组合物在黄连根腐病防治中的应用


[0001]本专利技术涉及植物病害生物防治
，具体涉及一株蜡样芽孢杆菌菌株
Y9
及其组合物在黄连根腐病防治中的应用
。

技术介绍

[0002]黄连
(Coptidis rhizoma)
是我国常用大宗药材，主要分布于重庆市东部
、
湖北省西部
、
湖南
、
陕西
、
贵州等地，现主产于重庆市石柱县和湖北省利川市
。
重庆石柱素有“黄连之乡”美誉，为鸡爪黄连
(Coptis chinensis Franch.)
的道地产区
。
在石柱，黄连是高山地区的主导产业，超过
80
％的农民以种植黄连为生，黄连种植收入约占农业收入的
70
％
。
近年来，黄连根腐病已严重制约石柱黄连产业的发展，平均发病率达
40
％，严重地块达
80
％
‑
90
％
。
病害从春季开始，夏季达到高峰，阻碍根系的生长，造成维管组织坏死，最终导致植株萎蔫死亡
。
受感染的黄连植物生长发育迟缓，大部分须根和主根为黑褐色，严重感染的植物枯萎坏死
。
据报道，黄连根腐病可由镰刀菌属
(Fusarium spp.)、
间座壳属
(Diaporthe spp.)、r/>腐霉属
(Pythium spp.)、
土赤壳属
(Ilyonctric spp.)
等真菌引起，其中腐皮镰刀菌
(Fusarium solani)
和燕麦镰刀菌
(F.avenaceum)
是报道较多的病原
。
[0003]对于黄连根腐病的防治目前主要还是化学防治，而且黄连根腐病早期症状不明显，很多连农不能及时发现，在实际生产中往往出现重化学防治却轻预防的现象
。
但随着公众对药品安全
、
农药残留和环境污染认知水平的不断提升，对环境友好
、
绿色无公害的生物防治技术成为重要研究方向
。
芽孢杆菌和木霉都是研究和应用最多的生防菌剂，对很多病原真菌都有一定抑制作用
。
关于利用芽孢杆菌和木霉进行根腐病等土传病害的防治已有成功案例，但目前对黄连根腐病的生物防治还鲜有报道
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种蜡样芽孢杆菌
Y9
及其组合物在黄连根腐病防治中的应用，以解决目前使用化学农药防治导致的黄连农药残留问题
。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]1、
一株蜡样芽孢杆菌菌株
Y9
及其组合物在黄连根腐病防治中的应用
[0007]所述菌株
Y9
于
2023
年3月
30
日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：
CGMCC No.26960
；所述组合物为不同配比的
HY、LY、HYJ、LYJ
或
HLYJ
，其中，
HY
为哈茨木霉
(Trichoderma harzianum)
和
Y9
按种子菌液体积比
1:5、1:2、1:1、2:1
或
5:1
组合发酵而成；
LY
为深绿木霉
(Trichoderma atroviride)
和
Y9
按种子菌液体积比
1:5、1:2、1:1、2:1
或
5:1
组合发酵而成；
HYJ
为哈茨木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌
(Bacilus amyloliquefaciens)
按种子菌液体积比
1:1:1
或
4:1:1
组合发酵而成；
LYJ
为深绿木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌按种子菌液体积比
1:1:1
或
4:1:1
组合发酵而成；
HLYJ
为哈茨木霉
、
深绿木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌按种子菌液体积比
1:1:1:1
或
2:2:1:1
组合发酵而成
。
oxysporum
，
Fusarium graminearum
，
Fusarium fujikuroi
，
Clonostachys rosea
，
Collteotrichum fructicola
，
Collteotrichum gloeosporiodies and Pestalotiopsis olivacea)
的平板对峙结果，
b
：
Y9
对7株病原真菌的菌丝生长的抑制率
。
[0024]图3为
Y9
形态鉴定，图中，
a
：
Y9
在
MYP
平板上的形态，
b
：
Y9
在
NA
平板上的形态，
c
：
Y9
的革兰氏染色，
d
：
Y9
的芽孢染色
。
[0025]图4为基于
16S rRNA、gyrA
和
rpoB
基因构建的芽孢杆菌分离株的系统发育树
。B.mycoides
‑
蕈状芽孢杆菌；
B.toyonensis
‑
东京芽孢杆菌；
B.cereus
‑
蜡样芽孢杆菌；
B.thuringiensis
‑
苏云金芽孢杆菌；
B.wiedmannii
‑
维兹曼芽孢杆菌；
B.mobilis
‑
运动芽孢杆菌；
B.licheniformis
‑
地衣芽孢杆菌；
B.amyloliquefaciens
‑
解淀粉芽孢杆菌；
Brevibacillus laterosporus
‑
侧孢短芽孢杆菌
。
[0026]图5为
Y9
对黄连根腐病的盆栽防效，图中，
a
：不同处理组黄连的表型，
b
‑
e
：分别为
Mock、Fs、Fs+Y9
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株蜡样芽孢杆菌菌株
Y9
及其组合物在黄连根腐病防治中的应用，其特征在于，所述菌株
Y9
于
2023
年3月
30
日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：
CGMCC No.26960
；所述组合物为不同配比的
HY、LY、HYJ、LYJ
或
HLYJ
，其中，
HY
为哈茨木霉
(Trichoderma harzianum)
和
Y9
按种子菌液体积比
1:5、1:2、1:1、2:1
或
5:1
组合发酵而成；
LY
为深绿木霉
(Trichoderma atroviride)
和
Y9
按种子菌液体积比
1:5、1:2、1:1、2:1
或
5:1
组合发酵而成；
HYJ
为哈茨木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌
(Bacilus amyloliquefaciens)
按种子菌液体积比
1:1:1
或
4:1:1
组合发酵而成；
LYJ
为深绿木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌按种子菌液体积比
1:1:1
或
4:1:1
组合发酵而成；
HLYJ
为哈茨木霉
、
深绿木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌按种子菌液体积比
1:1:1:1
或
2:2:1:1
组合发酵而成
。2.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述哈茨木霉或深绿木霉的种子菌液浓度约为
106个孢子
/mL
，所述
Y9
或解淀粉芽孢杆菌的菌液浓度约为
OD
600
＝
0.5。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述哈茨木霉
、
深绿木霉
、Y9
和解淀粉芽孢杆菌的种子菌液制备过程为：
1)
菌株活化：将
Y9、
解淀粉芽孢杆菌菌株分别接种于
NA
培养基上，
30℃
培养1‑2天；将哈茨木霉
、
深绿木霉菌株分别接种于
PDA
培养基上，
25℃
培养5‑7天；
2)
发酵种子液：将步骤
1)
制备的活化菌株分别接种于
BP
液体培养基中，
30℃、160rpm
振荡培养
48h
，...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅鹏颖，朱致豫，李隆云，宋旭红，崔广林，丁刚，刘群栋，窦涛，
申请(专利权)人：重庆市中药研究院，
类型：发明
国别省市：