载制造技术

本发明专利技术涉及一种载

【技术实现步骤摘要】
载siRNA/NTCP
‑
Ab氟碳脂质纳米粒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒及其应用
。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒
(hepatitisBvirus,HBV)
感染是全球面临的重要公共卫生问题
。
[0003]文献报道
HBV
病毒复制与肝癌等严重肝病的发生密切相关，抑制病毒滴度会延缓疾病进展，因此，治疗的关键措施是抗
HBV
治疗
。
[0004]目前抗
HBV
治疗的药物主要有干扰素和核苷
(
酸
)
类似物
(nucleos(t)ideanalogues,NAs)
两大类，干扰素仅对不到
30
％的患者有显著效果，且部分患者副反应明显，失代偿期肝病
、
严重心血管疾病
、
甲状腺疾病等患者禁用
。
自拉米夫定
1999
年上市以来，阿德福韦
(adefovir)、
恩替卡韦
(entecavir)
及替比夫定
(telbivudine)
相继在我国上市，
NAs
以其抑制病毒复制效果好，可选择的种类较多，毒副作用相对小及患者耐受性好，已广泛应用于慢性乙型肝炎
、
乙肝肝硬化和
HBV
感染相关的肝癌患者的治疗中，通过持续的抗病毒治疗可维持
HBV
复制被抑制的状态，从而减轻肝细胞炎症坏死及纤维化，延缓和减少肝脏失代偿
、
肝硬化及肝癌的发生，使大部分接受治疗的患者获益
。
然而，
NAs
在抗病毒治疗过程中可能出现的病毒耐药问题明显降低了抗病毒治疗的疗效
、
使患者对治疗失去信心，影响患者的依从性，对患者的预后和病情转归产生不良影响
。NAs
在抗病毒治疗过程中可能出现的病毒耐药问题是目前临床面临的难题，且
NAs
的服药时间长，患者的经济负担较重，
cccDNA
的存在使得患者停药后易出现病毒学反跳
、
生化学突破，能实现临床或功能性治愈的患者极少，目前对于何时能停药尚无定论，长期的用药可能带来不良反应等，使抗
HBV
治疗的发展处于瓶颈阶段
。
[0005]尽管目前已有多种治疗药物可以用于治疗乙肝，但仅有极少数能实现临床治愈
。
靶向纳米粒是指将药物或基因以纳米粒为载体的形式进行递送，逐渐被应用于临床多个领域，因纳米粒具有靶向性
、
可控性等特点，其治疗乙肝具有增强治疗效果
、
降低毒副作用等优势，在一定程度上可以实现精准给药
、
减少药物浪费
、
提高药物利用率和疗效等，从而降低治疗成本
、
减轻患者经济负担
。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法
。
还提供一种载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制药用途
。
[0007]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]1.
载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法，所述制备方法的具体步骤如下：
[0009](1)
将磷脂聚乙二醇氨基
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱
、
二棕榈酰磷脂酰甘油
、
泊洛沙姆
PF68
和胆固醇混合并溶于氯仿，搅拌至生成透明溶液，去除有机溶剂，形成均一脂质薄膜，加入水水合得到半透明的乳光混悬液，再加入
SIRT1
‑
siRNA
混合，用均质机分散，同时将液态氟碳按体积比1：8逐滴加入上述溶液中，之后用细胞破碎仪乳化，最后得到乳白色的乳
剂；
[0010](2)
将乳剂置于冰浴条件下进行探针超声振荡，制得载
siRNA
液态氟碳纳米粒；
[0011](3)
通过链霉亲和素
‑
生物素法链接：以碳化二亚胺作为偶联剂将链霉亲和素和载
siRNA
液态氟碳纳米粒结合，再加入生物素化的
NTCP
‑
Ab
，使其与连接链霉亲和素的载
siRNA
液态氟碳纳米粒结合，得到载
siRNA/NTCP
‑
Ab
主动靶向氟碳脂质纳米粒
。
[0012]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，所述液态氟碳为全氟己烷和全氟戊烷体积比1：1比例的混合物
。
[0013]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，在步骤
(1)
中，按每
5mg
磷脂聚乙二醇氨基计，加入二棕榈酰磷脂酰胆碱
5mg
，二棕榈酰磷脂酰甘油
50
μ
l
，泊洛沙姆
PF682mg
，胆固醇
5mg
，
SIRT1
‑
siRNA 10
μ
l。
[0014]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，均质机分散为
8000r/min
，
5min
‑
10min。
[0015]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，去除有机溶剂为真空旋转蒸发去除有机溶剂
。
[0016]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，探针超声振荡以
70W
‑
100W
的功率，时间
10
‑
30
秒进行探针超声振荡，得到
80
‑
500nm
左右粒径大小的载
siRNA
液态氟碳纳米粒
。
[0017]进一步，所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法中，步骤
(2)<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤如下：
(1)
将磷脂聚乙二醇氨基
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱
、
二棕榈酰磷脂酰甘油
、
泊洛沙姆
PF68
和胆固醇混合并溶于氯仿，搅拌至生成透明溶液，去除有机溶剂，形成均一脂质薄膜，加入水水合得到半透明的乳光混悬液，再加入
SIRT1
‑
siRNA
混合，用均质机分散，同时将液态氟碳按体积比1：8逐滴加入上述溶液中，之后用细胞破碎仪乳化，最后得到乳白色的乳剂；
(2)
将乳剂置于冰浴条件下进行探针超声振荡，制得载
siRNA
液态氟碳纳米粒；
(3)
通过链霉亲和素
‑
生物素法链接：以碳化二亚胺作为偶联剂将链霉亲和素和载
siRNA
液态氟碳纳米粒结合，再加入生物素化的
NTCP
‑
Ab
，使其与连接链霉亲和素的载
siRNA
液态氟碳纳米粒结合，得到载
siRNA/NTCP
‑
Ab
主动靶向氟碳脂质纳米粒
。2.
根据权利要求1所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，所述液态氟碳为全氟己烷和全氟戊烷体积比1：1比例的混合物
。3.
根据权利要求1所述的载
siRNA/NTCP
‑
Ab
氟碳脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，在步骤
(1)
中，按每
5mg
磷脂聚乙二醇氨基计，加入二棕榈酰磷脂酰胆碱
5mg
，二棕榈酰磷脂酰甘油
50
μ
l
，泊洛沙姆
PF682mg
，胆固醇
5mg
，
SIRT1
‑
siRNA10
μ
l。4.
根据权利要求1所述的载
siRNA/NTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：康娟，张大志，蔡大川，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：