抗体药物偶联物的制备方法技术

属于生物技术领域，涉及抗体药物偶联物的制备方法，其包括：

【技术实现步骤摘要】
抗体药物偶联物的制备方法


[0001]本公开属于生物
，涉及抗体药物偶联物的制备方法，以及采用该制备方法制备得到的抗体药物偶联物
。

技术介绍

[0002]抗体药物偶联物（
Antibody
‑
Drug Conjugate
，
ADC
）是结合了治疗性抗体的高特异性和细胞毒药物的高杀伤活性的一类药物，其中治疗性抗体部分与细胞毒药物部分通过中间的接头部分连接
。
与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低对正常细胞的影响
。
目前，自
2000
年第一个抗体药物偶联物
Mylotarg
在美国上市以来，全球范围内已有至少十款
ADC
推向市场，同时在抗肿瘤领域也有文献报道多种新型抗体药物偶联物的研究
。
[0003]抗体通常具有四个链间二硫键，其可以作为抗体与接头
‑
有效载荷的结合位点
。
已知存在产生
DAR4
的抗体药物偶联物的方法，然而一些偶联方法常会导致抗体药物偶联物的异质性较高，
D4
含量低，还有一些方法的反应条件苛刻，存在有毒试剂等，因此，仍需要开发新的抗体与细胞毒药物的偶联方法
。

技术实现思路

[0004]制备方法本公开提供了一种抗体药物偶联物的制备方法，其包括：
(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在缓冲液中反应，以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键；
(ii) 使接头
‑
有效载荷与步骤
(i)
中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应；其中，步骤
(i)
中的反应温度为大于
10℃。
[0005]在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中的反应温度为
10.5℃
至
20℃。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中的反应温度为
10.5℃
至
15℃。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中的反应温度为
10.5℃
至
14℃。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中的反应温度为
10.5℃
至
11℃、11℃
至
14℃、
或
11℃
至
13℃。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中的反应温度为
10.5℃、11℃、11.5℃、12℃、12.5℃、13℃、13.5℃、14℃、14.5℃、15℃、
或上述任意值形成的范围
。
[0006]在一些实施方案中，所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为
1:1
至
4:1。
在一些实施方案中，所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为
2:1
至
3:1。
在一些实施方案中，所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为
2.4:1
至
2.5:1。
在一些实施方案中，所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为
2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、
或上述任意值形成的范围
。
[0007]在一些实施方案中，所述还原剂可以是三
(2
‑
羧基乙基
)
膦（
TCEP
）或其盐
、
二硫苏糖醇或2‑
巯基乙醇
。
在一些实施方案中所述还原剂为三
(2
‑
羧基乙基
)
膦或其盐，优选为三
(2
‑
羧基乙基
)
膦盐酸盐（
TCEP
·
HCl
）
。
[0008]在一些实施方案中，所述缓冲液可以是
HEPES
（4‑
(2
‑
羟乙基
)
‑1‑
哌嗪乙磺酸）缓冲液
、
组氨酸缓冲液
、
磷酸盐缓冲液
、
硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液
。
在一些实施方案中，所述缓冲液为组氨酸缓冲液
。
在一些实施方案中，所述缓冲液为组氨酸
‑
盐酸缓冲液
。
在一些实施方案中，所述缓冲液的浓度为
1 mM
至
30 mM
，例如
5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM
或
30 mM
，优选为
20 mM。
[0009]在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为1至
10
小时
。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为1至5小时
。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为2至4小时
。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为2至3小时
。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为
2.5
至3小时
。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的时间为
2.1
小时
、2.2
小时
、2.3
小时
、2.4
小时
、2.5
小时
、2.6
小时
、2.7
小时
、2.8
小时
、2.9
小时
、3
小时
、3.1
小时
、3.2
小时
、3.3
小时
、3.4
小时
、3.5
小时
、3.6
小时
、3.7
小时
、3.8
小时
、3.9
小时
、4
小时
、
或上述任意值形成的范围
。
[0010]在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的
pH
为5至
9。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的
pH
为6至
8。
在一些实施方案中，所述步骤
(i)
中反应的
pH
为
6.5
至...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
10
所示氨基酸序列具有至少
85...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦宇，刘金坡，李盈淳，吴纲，徐佳伟，陈梅梅，刘翔，张永波，王晓伟，
申请(专利权)人：正大天晴药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：