N6-制造技术

本发明专利技术涉及生物学技术领域，提出了

【技术实现步骤摘要】
N6
‑
甲基腺苷的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物学
，具体的，涉及
N6
‑
甲基腺苷的制备方法
。

技术介绍

[0002]在
20
世纪
70
年代初，科学家发现了
N6
‑
甲基腺苷（
m6A
）甲基化修饰存在于
mRNA
上，是目前最常见的真核生物
mRNA
甲基化修饰类型之一，也存在于
tRNA
，
rRNA
中，
m6A
在甲基化修饰酶和蛋白参与下可直接或间接影响
mRNA
降解
、
翻译和剪接等生物学过程，
m6A
在小脑
、
前脑
、
大脑皮质
、
神经干细胞
、
突出等神经系统组织中广泛分布，在神经系统中广泛存在并参与控制基因表达重要调控机制
。
在相关甲基化修饰酶和蛋白的参与下，
m6A
通过影响
mRNA“生命周期”进而在神经系统的生长发育
、
相关功能
、
疾病的发生发展等方面发挥着重要作用
。
[0003][0004]研究发现，
Cap1(m6A)
帽类似物可以增加
mRNA
的稳定性和翻译效率（中华神经科学杂志，
2020,53(10):819
‑
823.
）
。2017
年的
Nature
文献报道了5′
Cap
中的
m6A
控制
mRNA
的稳定性
。2018
年的
Science
报道了5′
Cap
中的
m6A
在
mRNA
的翻译过程中有重要的作用
。
其主要原因可能是
Cap1(m6A)
帽类似物在体内具有更高的稳定性，不容易被
DCP2
等脱帽
。m6A
还可通过
YTHDF2
维持内皮
‑
造血转化过程的平衡，进而调控造血干细胞的定向分化
。
目前现有技术中制备的是核苷类化合物，而
m6A
也是一种核苷类化合物，而现有技术的制备工艺存在收率低，反应条件复杂，反应中所使用的试剂不易获取的缺陷
。
[0005]因此，基于
m6A
在
mRNA
中在临床医学上的表现及现有技术中的制备工艺缺陷，制备出高纯度的
m6A
将变得十分有意义
。

技术实现思路

[0006]本专利技术提出
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，并对所得到的目的产物进行重结晶提纯，制备出高纯度的
N6
‑
甲基腺苷，解决了相关技术中
mRNA
生产及应用过程中
N6
‑
甲基腺苷的供应难的问题
。
[0007]本专利技术的技术方案如下：本专利技术提出
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，包括以下步骤：步骤一：以腺苷为原料，加入酰化试剂，进行取代基的保护，得到产物
M1
；步骤二：以产物
M1
为原料，加入
1,8
‑
二氮杂二环
[5.4.0]十一碳
‑7‑
烯和卤代甲烷，进行选择性上甲基，得到产物
M2
；
步骤三：以产物
M2
为原料，加入浓氨水，脱去保护基，得到产物
N6
‑
甲基腺苷
。
[0008][0009]作为进一步的技术方案，所述酰化试剂为乙酸酐或乙酰氯
。
[0010]作为进一步的技术方案，所述卤代甲烷为碘甲烷或溴甲烷
。
[0011]作为进一步的技术方案，所述腺苷与酰化试剂的摩尔比为
1:5~10。
[0012]作为进一步的技术方案，所述上保护基团反应的反应温度为
20~80℃
，反应时间为
3~5h。
[0013]作为进一步的技术方案，所述产物
M1
与
1,8
‑
二氮杂二环
[5.4.0]十一碳
‑7‑
烯的质量比为
1:0.5~3。
[0014]作为进一步的技术方案，所述产物
M1
与卤代甲烷的摩尔比为
1:0.5~3。
[0015]作为进一步的技术方案，选择性上甲基反应的反应温度为
0~10℃
，反应时间为
3~8h。
[0016]作为进一步的技术方案，所述
M2
与浓氨水的质量比为
1:1~5。
[0017]作为进一步的技术方案，所述脱保护基反应的反应温度为
20~25℃
，反应时间为
3~8h。
[0018]作为进一步的技术方案，所述步骤一中，上保护基反应完成后，还包括将产物
M1
进行提纯处理，具体为向产物
M1
中加入乙醇反应
1~3h
，旋转蒸发，分别用二氯甲烷
、
盐水洗涤，干燥，减压蒸馏
。
[0019]作为进一步的技术方案，所述步骤二中，选择性上甲基完成后，还包括将产物
M2
进行提纯处理，具体为向产物
M2
中加入二氯甲烷，用盐酸调节
pH
值为7，洗涤，干燥，减压蒸馏后用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂结晶
。
[0020]作为进一步的技术方案，所述步骤三中，脱保护基反应完成后，还包括将产物
N6
‑
甲基腺苷进行提纯处理，具体为将反应后的产物
N6
‑
甲基腺苷用乙酸乙酯和石油醚体积比为
1:5~1:1
的混合溶剂进行重结晶
。
[0021]本专利技术的工作原理及有益效果为：
1、
本专利技术中，以腺苷为初始原料，与酰化试剂发生酰化反应进行上保护基得到产物
M1
，然后在产物
M1
中加入
1,8
‑
二氮杂二环
[5.4.0]十一碳
‑7‑
烯和碘甲烷，进行选择性上甲基得到产物
M2
，再将产物
M2
进行脱保护得到产物
N6
‑
甲基腺苷（
m6A
）
。
本专利技术每步反应中使用的酰化试剂
、
卤代甲烷...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：以腺苷为原料，加入酰化试剂，进行上保护基反应，得到产物
M1
；步骤二：以产物
M1
为原料，加入
1,8
‑
二氮杂二环
[5.4.0]
十一碳
‑7‑
烯和卤代甲烷，进行选择性上甲基反应，得到产物
M2
；步骤三：以产物
M2
为原料，在碱性条件下进行脱保护基反应，得到产物
N6
‑
甲基腺苷；合成路线如下：
。2.
根据权利要求1所述的
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，所述酰化试剂为乙酸酐或乙酰氯
。3.
根据权利要求1所述的
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，所述卤代甲烷为碘甲烷或溴甲烷
。4.
根据权利要求1所述的
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，所述腺苷与酰化试剂的摩尔比为
1:5~10。5.
根据权利要求1所述的
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，所述上保护基反应的反应温度为
20~80℃
，反应时间为
3~5h。6.
根据权利要求1所述的
N6
‑
甲基腺苷的制备方法，其特征在于，所述产物
M1
与卤代甲烷的质量比为
1:0.5~3
；优选的，所述产物
M1
与
1,8
‑
二氮杂二环
[5.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：周金玉，李静简，宋艳民，郝文波，
申请(专利权)人：天津全和诚科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：