一种提高白桦抗叶枯病的转基因方法技术

本发明专利技术公开了一种提高白桦抗叶枯病的转基因方法，属于转基因技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种提高白桦抗叶枯病的转基因方法


[0001]本专利技术涉及转基因
，特别是涉及一种提高白桦抗叶枯病的转基因方法
。

技术介绍

[0002]白桦
(Betulaplatyphylla Suk.)
属桦木科桦木属，是一种广泛分布于东北地区的落叶阔叶树种，是我国重要的绿化树种之一
。
在白桦苗木培育的过程中，白桦幼苗极易受到真菌
、
细菌等致病菌的侵害，由链格孢菌
(AlternariaNees)
等真菌引起的叶枯病是最为常见的白桦苗期病害，往往导致植株叶片产生大面积病斑，严重影响了苗木的生长，甚至导致大量植株死亡
。
[0003]为了控制叶枯病，在生产中通常会多次喷施波尔多
、
代森锰锌
、
托布津等药剂，也有一些施用复合微生物菌剂控制叶枯病的报道，但施用后效果有限，更多以预防叶枯病发生为主，做好科学管理及合理抚育，但这样一来就需要投入大量的人力物力
。
近年来对白桦叶枯病的研究多聚焦在病原菌的分离和鉴定，有一部分对于通过基因工程提高白桦抗病性的报道，但对于抗病机理的研究尚不明确，目前已鉴定出一些植物体中的免疫正调控因子，但在白桦育种工程中的应用还处于理论研究阶段
。
因此，进一步研究并筛选参与植物抗病过程的关键转录因子，对培育抗病转基因白桦，综合防控白桦叶枯病具有重要意义
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种提高白桦抗叶枯病的转基因方法，以解决上述现有技术存在的问题
。
本专利技术通过构建
BpSPL6
基因过表达和抑制表达白桦株系，验证了
BpSPL6
基因过表达白桦株系具有较强的抗叶枯病能力
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供
BpSPL6
基因在提高白桦抗叶枯病能力中的应用，所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0007]本专利技术还提供一种提高白桦抗叶枯病能力的方法，包括将
BpSPL6
基因导入白桦，使所述
BpSPL6
基因过表达的步骤；
[0008]其中，所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0009]进一步地，将所述
BpSPL6
基因导入白桦是通过重组农杆菌转化白桦实现的；
[0010]其中，所述重组农杆菌中含有
BpSPL6
基因过表达载体；
[0011]所述
BpSPL6
基因过表达载体中包含如
SEQ ID NO.3
所示序列
。
[0012]进一步地，所述重组农杆菌转化白桦是转化白桦的合子胚
。
[0013]进一步地，所述叶枯病的病原菌包括链格孢菌
。
[0014]本专利技术还提供
BpSPL6
基因在培育白桦抗叶枯病株系中的应用，通过过表达所述
BpSPL6
基因，提高白桦抗叶枯病的能力；所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0015]本专利技术还提供一种培育白桦抗叶枯病株系的方法，包括将
BpSPL6
基因导入白桦，
获得
BpSPL6
基因过表达白桦株系的步骤；
[0016]其中，所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0017]进一步地，将所述
BpSPL6
基因导入白桦是通过重组农杆菌转化白桦实现的；
[0018]其中，所述重组农杆菌中含有
BpSPL6
基因过表达载体；
[0019]所述
BpSPL6
基因过表达载体中包含如
SEQ ID NO.3
所示序列
。
[0020]进一步地，所述重组农杆菌转化白桦是转化白桦的合子胚
。
[0021]进一步地，所述叶枯病的病原菌包括链格孢菌
。
[0022]本专利技术公开了以下技术效果：
[0023]本专利技术在揭示白桦
BpSPL6
基因功能的基础上，获得
BpSPL6
基因过量表达株系，
BpSPL6
基因过表达株系具有较强的抗叶枯病能力，是有效的白桦抗叶枯病的转基因新种质
。
[0024]本专利技术通过转基因技术构建
BpSPL6
基因过表达白桦株系，能够显著提高白桦抗叶枯病的能力，为综合防控白桦叶枯病提供一个新的途径
。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0026]图1为
BpSPL6
基因
PCR
产物电泳图谱，其中，
M
：
DL 2,000DNAMarker
；1：
BpSPL6
基因；
[0027]图2为
BpSPL6
‑
EAR
基因
PCR
产物电泳图谱，其中，
M
：
DL 2,000DNAMarker
；1‑2：
EAR
‑
BpSPL6
基因；
[0028]图3为转
BpSPL6
基因过表达白桦株系的获得，其中，
a
：种子的侵染；
b
：抗性愈伤的获得；
c
：丛生苗；
d
：生根苗；
e
和
f
：移栽苗；
[0029]图4为转
BpSPL6
基因抑制表达白桦株系的获得，其中，
a
：种子的侵染；
b
：抗性愈伤的获得；
c
：丛生苗；
d
：生根苗；
e
和
f
：移栽苗；
[0030]图5为转
BpSPL6
基因过表达白桦株系分子检测，其中，
M
：
DL 2,000Marker
；1：阳性对照；2：阴性对照；3‑7：
OE6
‑1～5；
[0031]图6为转
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BpSPL6
基因在提高白桦抗叶枯病能力中的应用，其特征在于，所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。2.
一种提高白桦抗叶枯病能力的方法，其特征在于，包括将
BpSPL6
基因导入白桦，使所述
BpSPL6
基因过表达的步骤；其中，所述
BpSPL6
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将所述
BpSPL6
基因导入白桦是通过重组农杆菌转化白桦实现的；其中，所述重组农杆菌中含有
BpSPL6
基因过表达载体；所述
BpSPL6
基因过表达载体中包含如
SEQ ID NO.3
所示序列
。4.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述重组农杆菌转化白桦是转化白桦的合子胚
。5.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述叶枯病的病原菌包括链格孢菌
。6.BpSPL6
基因在培育白桦抗叶枯病...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩贵杰，李芳蕊，刘羽婷，李月，李慧玉，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：