具有四片叶子的三叶草新品种及其繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种称作“幸运草”的具有四片叶子的三叶草新品种及其大规模繁殖的方法。繁殖该三叶草新品种的方法包括以下步骤：（ａ）三叶草消毒，（ｂ）依次用化学试剂处理三叶草，以诱导三叶草茎的突变以及细胞分裂，（ｃ）诱导突变的三叶草生根，（ｄ）通过无性繁殖的方式繁殖三叶草新品种，（ｅ）对比三叶草新品种与野生型三叶草的属性，和（ｆ）确定三叶草新品种的属性的一致性。本发明专利技术的三叶草新品种具有很强的生命力、优良的抗冷能力和抗病能力。而且，它生长速度快，可以在强光下生长，还可以竞争过野草。该三叶草不但可以用作饲养，还可以用来改善土壤的品质。所以，该三叶草新品种具有很高的商业和装饰价值。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及具有四片叶子的三叶草新品种及其无性繁殖方法。在花语中，具有四片叶子的三叶草意味着“幸运”、“希望”、“爱情”、“热情”，因此很多人想得到具有四片叶子的三叶草，但是找到野生型的具有四片叶子的三叶草比较困难。这样，既然具有四片叶子的三叶草是稀有的并且具有装饰价值，它们也就具有巨大的商业价值。因此，具有四片叶子的三叶草可以用于各种途径，比如装饰品、公关赠品、礼物、压缩花和干花，以吸引消费者。所以，需要开发具有四片叶子的三叶草，并且要求它能够比较容易地适应新环境、生长速度快。韩国传统的野生型的三叶草，偶尔会有四片叶子。该品种具有卵形的绿叶、相对较短的茎，但是具有较强的覆盖地面的能力。由于该品种只有在自然突变的情况下才会有四片叶子，因而大量生产具有四片叶子的三叶草比较困难。另一方面，从其他国家引入韩国的具有三片叶子的三叶草是作为饲料来种植和使用的，包括可以买到的红三叶草，比如TR2000、泰特斯(Titus)、肯蓝德(Kenland)、安特蓝斯(Atlas)。但是，这些品种不但难以种植，并且很难适应韩国的环境。因此，需要开发能够适应韩国环境的具有四片叶子的三叶草新品种，并且能够很快的生长、具有较强的生命力。本专利技术的一个目的是提供一种具有四片叶子的三叶草新品种。本专利技术的另一个目的是提供一种繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法。为了实现本专利技术的第一个目的，提供了一种具有四片叶子的三叶草。本专利技术的一个方面，从野生型的三叶草上切下一条匍匐茎用诱变剂处理。尤其是，这段带有三片叶子的匍匐茎是从白三叶草上切下来的，然后用乙醇消毒。接着，用变位酶处理，比如EMS(乙基甲基磺酸酯)、BAP(6-苄氨基腺嘌呤)、IAA(吲哚乙酸)和NAA(α-萘乙酸)，以诱导突变，并在培养基中培养。然后，从培养基中培养的芽选择具有四片叶子的三叶草，进行重复培养。具有四片叶子的三叶草新品种在培养基中诱导生根。生根的三叶草转移到花盆中，从盆中选择合适的茎。然后，再培养选择的组织繁殖到5代。最后，对比改进的具有四片叶子的三叶草新品种与野生型的三叶草的属性，确定三叶草新品种的属性的一致性。为了实现本专利技术的第二个目的，提供了一种繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法，其中三叶草是无性繁殖的。本专利技术的繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法包括以下步骤(a)三叶草消毒，(b)依次用化学试剂处理三叶草，以诱导三叶草茎的突变以及细胞分裂，(c)诱导突变的三叶草茎生根，(d)通过无性繁殖的方式繁殖三叶草新品种，(e)对比三叶草新品种与野生型三叶草的属性，和(f)确定三叶草新品种的属性的一致性。在步骤(a)中，从野生型的具有三片叶子的白三叶草上切下一条带有叶子的匍匐茎，除去所有的叶子。然后，将带有生长点的匍匐茎切成约3cm长，依次用乙醇消毒。用蒸馏水冲洗消毒以后的匍匐茎。最后，用浓度为1.0％的NaOCl溶液处理茎段15分钟进行消毒，然后用无菌水冲洗3遍。在步骤(b)中，用乙基甲基磺酸酯处理从步骤(a)得到的茎段以诱导白三叶草芽的突变和细胞分裂，它还在MS基本培养基中依次用6-苄氨基腺嘌呤、吲哚乙酸、α-萘乙酸处理。在步骤(c)中，从培养的白三叶草茎段中选择具有四片叶子的三叶草茎，在培养基中使其生根。在步骤(d)中，生根的茎被转移到花盆中，使具有四片叶子的三叶草生长。然后，从盆中选择具有四片叶子的三叶草茎，以培养5代茎组织，由此通过无性繁殖的方式得到具有四片叶子的三叶草新品种，它被称作“幸运草”。在步骤(e)中，调查被称作“幸运草”的三叶草新品种的属性，并与野生型的三叶草进行对比。在步骤(f)中，将改进的具有四片叶子的三叶草的茎或根分成几段进行移植。最后，确定三叶草新品种的属性的一致性。具体实施例方式本专利技术的一个方面，提供了一种繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法。繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法包括以下步骤(a)三叶草消毒，(b)依次用化学试剂处理三叶草，以诱导三叶草茎的突变以及细胞分裂，(c)诱导突变的三叶草生根，(d)通过无性繁殖的方式繁殖三叶草新品种，(e)对比三叶草新品种与野生型三叶草的属性，和(f)确定三叶草新品种新品种属性的一致性。在步骤(a)中，从野生型的具有三片叶子的白三叶草上切下一条带有叶子的匍匐茎，除去所有的叶子。然后，将带有生长点的匍匐茎切成约3cm的长度，然后依次用乙醇消毒。最后，用蒸馏水冲洗消毒以后的匍匐茎。在步骤(b)中，用乙基甲基磺酸酯处理从步骤(a)得到的茎段以诱导白三叶草芽的突变和细胞分裂，它还在MS基本培养基中依次用6-苄氨基腺嘌呤、吲哚乙酸、α-萘乙酸处理。在步骤(c)中，从培养的白三叶草芽茎段中选择具有四片叶子的三叶草茎，在培养基中使其生根。在步骤(d)中，生根的茎被转移到花盆中，使具有四片叶子的三叶草生长。然后，从盆中选择具有四片叶子的三叶草茎，以培养5代茎组织，由此通过无性繁殖的方式得到具有四片叶子的三叶草新品种，它被称作“幸运草”。在步骤(e)中，调查三叶草新品种的属性，并与野生型的三叶草进行对比。在步骤(f)中，将改进的具有四片叶子的三叶草的茎或根分成几段进行移植。最后，确定三叶草新品种的属性的一致性。优选地，带有三片叶子的茎被切成7cm的长度。除去所有的叶子，然后将带有生长点的匍匐茎切成约3～4cm的长度。然后，将茎段转移到装有70％乙醇溶液的三角瓶中浸泡30秒钟进行消毒，以无菌水冲洗3次。然后，在超净台将茎段切成2～3mm长，其中每一段都带有一个生长点。在超净台中，将切开的茎段转移到0.1～0.3μg/L的乙基甲基磺酸酯溶液中浸泡3秒钟，以诱导突变和细胞分裂。接着，用无菌水冲洗切开的茎段。然后，将切开的茎段转移到含有MS基本培养基、0.5～2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、0.5mg/L的α-萘乙酸的培养基中培养，产生具有四片叶子的三叶草个体。重复上述步骤，生产具有四片叶子的三叶草芽，参见附图说明图1。生芽的茎段在培养基中培养以得到具有四片叶子的三叶草。然后，从三叶草茎中选择合适的茎，在含有MS基本培养基、0.5～5.0mg/L的吲哚乙酸、0.5～5.0mg/L的α-萘乙酸的培养基中培养。结果，形成了具有四片叶子的三叶草的芽和茎，同时也生出了直立生长的根。生根的三叶草转移到温室土壤中，它含有比例为1∶1∶1的珍珠岩、泥煤苔和无菌沙，其湿度为90％，温度为18～20℃，光强度为70％。结果，90％的芽正常生长。从按照上述方式得到的具有四片叶子的三叶草选择一条茎，重复培养5代。然后，得到的三叶草称作“幸运草”。调查“幸运草”的特征。当将这些特征与野生型的三叶草进行对比时，发现本专利技术的三叶草比野生型的三叶草长5～10cm，因为本专利技术的三叶草具有节点，并且脱离地表面生长，而野生型的则是匍匐生长。图2A和2B显示了根据本专利技术得到的具有三叶草新品种，其中三叶草的芽分别装在培养皿和花盆中。三叶草新品种分别具有四片心状的叶子，其叶片长度比野生型的三叶草短，宽度亦然。而且，野生型的三叶草具有深绿色的叶子，而本专利技术的三叶草则具有浅绿色的叶子。同时，图4显示了根据本专利技术得到的三叶草，其中的叶子具有心的形状。这四片叶子从同一茎上长出，三个白花形成一个总状花序。野生型三叶草一般可以种植2或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法，它包括以下步骤：（Ａ）提供带有叶子的野生型三叶草的茎段，它包括以下子步骤：（ａ）将带叶的野生型三叶草茎切成长约５ｃｍ的茎段；（ｂ）除去茎上所有的叶子，然后将带有生长点的茎切成３～４ｃｍ长 的茎段；（ｃ）将茎段转入三角瓶中，用浓度为７０％的乙醇溶液处理２０～３０秒对茎段进行消毒，然后用无菌水冲洗３遍；（ｄ）用浓度为１．０％的ＮａＯＣｌ溶液处理茎段１５分钟进行消毒，然后用无菌水冲洗３遍；（Ｂ）在超净台中将步骤（Ａ）得 到的无菌茎段切成２～３ｍｍ长，其中的每一个茎段都有一个生长点，以允许芽从茎段上长出；（Ｃ）将步骤（Ｂ）的茎段在以下条件培养：温度２０～２２℃，光强度５００ｌｕｘ，培养基含有ＭＳ基本培养基、０．５～２．０ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基腺嘌呤、０．５ ｍｇ／Ｌ的吲哚乙酸、０．５ｍｇ／Ｌ的α－萘乙酸，用５℃的水处理芽２０秒钟，然后用浓度为０．１～０．３μｇ／Ｌ的乙基甲基磺酸酯溶液处理，再用无菌水冲洗；和（Ｄ）对（Ｃ）培养得到的具有四片叶子的三叶草进行无性繁殖，它包括以下子步骤：（ａ ）当芽和根在组织培养和诱导根的培养基中长出时，将芽转移到温室土壤中，它含有比例为１∶１∶１的珍珠岩、泥煤苔和无菌沙，其湿度为９０％，温度为１８～２０℃，光强度为７０％；（ｂ）从在土壤中生长的５代选择具有四片叶子的三叶草重复进行组织培养的 无性繁殖；和（ｃ）对三叶草进行切分／移植或切割以得到新品种。...

【技术特征摘要】
KR 2002-2-28 2002-109121.一种繁殖具有四片叶子的三叶草新品种的方法，它包括以下步骤(A)提供带有叶子的野生型三叶草的茎段，它包括以下子步骤(a)将带叶的野生型三叶草茎切成长约5cm的茎段；(b)除去茎上所有的叶子，然后将带有生长点的茎切成3～4cm长的茎段；(c)将茎段转入三角瓶中，用浓度为70％的乙醇溶液处理20～30秒对茎段进行消毒，然后用无菌水冲洗3遍；(d)用浓度为1.0％的NaOCl溶液处理茎段15分钟进行消毒，然后用无菌水冲洗3遍；(B)在超净台中将步骤(A)得到的无菌茎段切成2～3mm长，其中的每一个茎段都有一个生长点，以允许芽从茎段上长出；(C)将步骤(B)的茎段在以下条件培养温度20～22℃，光强度500lux，培养基含有MS基本培养基、0.5～2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李元庆，
申请(专利权)人：李元庆，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]