【技术实现步骤摘要】
一种腈水合酶的固载与微环境调控方法及用于己二腈的转化
[0001]本专利技术涉及一种用含有单乙烯砜基
(VS)
和憎水基团的化合物与二乙烯基砜
(DVS)
在琼脂糖微球上固载腈水合酶的方法,并可以调控腈水合酶的催化选择性
。
技术背景
[0002]纯化自
Rhodococcuserythropolis CCM2595
的腈水合酶
(NHase)
具有十分优异的生物催化活性,对于二腈类化合物具有很好的选择性,在精细化学品的合成与污水处理方面有重要应用
。
例如:催化己二腈生成5‑
氰基戊酰胺,是合成农药的重要中间体
。
然而,游离的腈水合酶稳定性差
、
无法循环使用是限制其工业上应用的关键
。
酶共价偶联固定化提供了更高的稳定性,可重用性,具有易于操作,节能和连续流动生产的优势
。
然而,
NHase
由于稳定性差,往往在固定过程中不恰当的偶联位点造成酶的构象变化,保留活性严重下降
。
且偶联在载体表面的酶,缺乏对于分子取向的控制,存在传质困难
、
催化位点被遮蔽的问题
。
基于乙烯基砜与组氨酸标签的特异性反应,在与酶固定的过程中,对酶的取向进行控制,在表面实现定点生物偶联
。
相较于酶在载体表面发生的多点偶联,定点偶联可以很好的控制酶的分子取向,具有一定的普适性,是固载酶发展的重要 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种腈水合酶的固载与微环境调控方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:第一步:在有机碱的催化下,将载体与二乙烯基砜
、
含有单乙烯砜基和憎水基团的化合物在0~
37℃、
乙腈或乙醇作为溶剂的条件反应6~
12h
,得到含有
VS
基团修饰的载体;第二步:将步骤
(1)
得到的
VS
基团修饰的载体和腈水合酶在
PB
缓冲溶液中,在
0℃
~
20℃
下反应2~
12h
,得到固载腈水合酶
。2.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的载体包括琼脂糖微球
、
含有辛基的琼脂糖微球
、
含有羧基的琼脂糖微球中的一种或两种以上;所述的载体的粒径为
60
‑
150
μ
m。3.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的含有单乙烯砜基和憎水基团的化合物包括苯基乙烯基砜
、
甲基乙烯基砜
、
乙基乙烯基砜及3个碳到7个碳的烷基乙烯砜基中的一种或几种
。4.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的载体与乙烯基砜
、
含有单乙烯...
【专利技术属性】
技术研发人员:程昉,董继程,吴学松,张强,王黎,梁长海,
申请(专利权)人:大连理工大学,
类型:发明
国别省市:
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