分离的多核苷酸及其在癌症诊断中的应用制造技术

本申请属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测癌症的试剂盒及其应用

【技术实现步骤摘要】
NO.18
或
SEQ ID NO.19
中任一者的碱基序列
。
[0012]在其中一个实施例中，其是从生物样本中提取分离的
DNA、
或人工合成的
DNA。
[0013]本申请另一方面提供一种载体，其包含所述的多核苷酸
。
[0014]本申请另一方面提供一种重组质粒，包括所述的多核苷酸或所述的载体
。
[0015]本申请另一方面提供所述的多核苷酸
、
所述的载体或所述的重组质粒在制备癌症检测产品中的应用
。
[0016]在其中一个实施例中，所述癌症选自肺腺癌
、
肺鳞癌
、
乳腺癌
、
肝细胞癌
、
宫颈癌
、
膀胱癌
、
肾癌
、
结直肠癌
、
胃癌
、
食管癌
、
喉癌
、
口腔癌
、
胰腺癌
、
卵巢癌
、
胆管癌
、
胆囊癌或壶腹癌中的一种或多种
。
[0017]在其中一个实施例中，所述检测产品能够检测所述多核苷酸的甲基化水平
。
[0018]本申请另一方面还提供一种用于检测癌症诊断检测的试剂盒，所述试剂盒包括所述的多核苷酸
、
所述的载体
、
所述的重组质粒，和
/
或检测所述的多核苷酸甲基化水平的试剂
。
[0019]在其中一个实施例中，所述试剂包括引物对和
/
或检测探针
。
[0020]在其中一个实施例中，所述引物对包括核苷酸序列如
SEQ ID NO.7
～
SEQ ID NO.10
所示的任一上游引物，以及核苷酸序列如
SEQ ID NO.11
～
SEQ ID NO.13
所示的任一下游引物；可选地，所述检测探针可特异性识别如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列
。
[0021]可选地，所述检测探针的核苷酸序列如
SEQ ID NO.14
所示
。
[0022]在其中一个实施例中，所述检测探针具有荧光基团和淬灭基团
。
[0023]本申请的有益效果包括：
[0024]本申请所提供的分离的多核苷酸包括
SEQ ID NO.3
的全长或部分片段，至少包括4个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列，或者与其具有
90
％以上序列一致性的
CpG
位点与
SEQ ID NO.3
保持一致，且至少包括4个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列，选取该分离的多核苷酸制备的载体或所述的重组质粒用于肿瘤检测能够有效诊断多种癌症，并且与现有的肿瘤血清标志物
(
如
CEA、AFP
等
)
相比，能提升诊断灵敏度和特异性
。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案
、
更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍
。
[0026]图1为
Illumina 450K
芯片探针
cg11660826
在
16
种癌组织和癌旁正常组织中的甲基化水平；
[0027]图2为上游引物1和下游引物2扩增目标区域的扩增曲线；
[0028]图3为上游引物1和下游引物2扩增目标区域的熔解曲线
。
具体实施方式
[0029]下面结合实施方式和实施例，对本申请作进一步详细的说明
。
应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本申请公开内容理解更加透彻全面
。
除非另有定义，本申请所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同
。
[0030]术语
[0031]本申请中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案
。
[0032]术语“及
/
或”或“和
/
或”均是指包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合
。
[0033]术语“诊断”包括辅助诊断
、
复发风险评估
、
癌变风险和癌变程度的评估
、
预后判断等方面
。
[0034]术语“寡核苷酸”或“多核苷酸”或“核苷酸”或“核酸”是指具有两个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的分子，优选多于三个，并且通常多于十个
。
确切的大小将取决于许多因素，而所述因素又取决于寡核苷酸的最终功能或用途
。
寡核苷酸可以任何方式产生，包括化学合成
、DNA
复制
、
逆转录或其组合
。DNA
的典型脱氧核糖核苷酸是胸腺嘧啶
、
腺嘌呤
、
胞嘧啶和鸟嘌呤
。RNA
的典型核糖核苷酸是尿嘧啶
、
腺嘌呤
、
胞嘧啶和鸟嘌呤
。
[0035]术语“DNA
甲基化”是指在甲基转移酶的作用下，从甲基供体
S
‑
腺苷甲硫氨酸上转移一个甲基基团到胞嘧啶的第5位碳原子上
。DNA
的甲基化不改变
DNA
的序列，作为最常见的一种表观遗传修饰方式，其在胚胎发育
、
基因表达和基因组的稳定性中发挥关键作用，且
DNA
甲基化的改变通常发生在癌变的早期
。
鉴于肿瘤细胞基因组具有与正常细胞不同的
DNA
甲基化图谱，检测肿瘤细胞
DNA
甲基化模式的改变可以从生物样本中筛查和诊断癌症
。
然而，需要筛选高灵敏度
、
高特异性的甲基化分子标志物来区分癌症患者和健康人；为了实现无创或微创诊断，这些甲基化分子标志物需在体液样本如血液
、
唾液
、
尿液等中仍然具有良好的诊断性能
。
[0036]术语“甲基化水平”指的是一段
DNA
序列中一个或多个
CpG
二核苷酸中的胞嘧啶是否发生甲基化
、
或发生甲基化的频率
/
比例
/
百分数，既代表定性的概念又代表定量的概念
。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
分离的多核苷酸，选自如下任一组：
(a)
：包括
SEQ ID NO.3
的全长或部分片段，所述部分片段包括至少4个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列；
(b)
：与
(a)
具有
90
％以上序列一致性，
CpG
位点与
(a)
保持一致，且包括至少4个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列；
(c)
：
(a)
或
(b)
经亚硫酸氢盐转化后的多核苷酸
。2.
根据权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸选自包括至少6个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列的所述
(a)
组或
(b)
组，或包括至少6个如
SEQ ID NO.2
所示的碱基序列的
(a)
组或
(b)
组经亚硫酸氢盐转化后的多核苷酸
。3.
根据权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，包括如
SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.18
或
SEQ ID NO.19
中任一者的碱基序列
。4.
根据权利要求1‑3任一项所述的多核苷酸，其是从生物样本中提取分离的
DNA、
或人工合成的
DNA。5.
一种载体，其包含权利要求1‑4任一项所述的多核苷酸
。6.
一种重组质粒，包括如权利要求1‑4任一项所述的多核苷酸或权利要求5所述的载体
。7.
根据权利要求1‑4任一项所述的多核苷酸
、
权利要求5所述的载体或权利要求6所述的重组质粒在制备癌症检测产品中的应用
。8.
根据权利要求7所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：周谛晗，梁嘉琳，万慧，阮彦添，孙帆，周俊，董兰兰，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：