一种耐盐制造技术

本发明专利技术公开了一种耐盐

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐
β
‑
葡萄糖苷酶及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及一种耐盐
β
‑
葡萄糖苷酶及应用
。

技术介绍

[0002]纤维素酶是能将纤维素降解并最终转化成葡萄糖的一类酶的总称，包括内切葡聚糖酶
、
外切葡聚糖酶和
β
‑
葡萄糖苷酶
。
β
‑
葡萄糖苷酶
(EC 3.2.1.21)
是一组糖基水解酶，可水解末端非还原性
β
‑
D
‑
葡萄糖苷键
。
β
‑
葡萄糖苷酶广泛应用于食品
、
饲料
、
生物质生物燃料等行业
。
随着秸秆类作物的堆积及环境污染，
β
‑
葡萄糖苷酶受到越来越多的关注
。
β
‑
葡萄糖苷酶作为木质纤维素降解的关键酶，在工业生产及环境治理等方面发挥很大作用
。
[0003]β
‑
葡萄糖苷酶广泛存在于动物
、
植物
、
微生物中，而自然界中
99
％的微生物不易获得纯培养，未培养微生物也是地球上最大的尚未开发的生物资源
。
于是，引入了宏基因组学的方法，宏基因组学是从不可培养的微生物宏基因组中挖掘新型酶资源的有效技术
。
β/>‑
葡萄糖苷酶能够促进纤维素的水解，但在生物催化过程中生成的产物葡萄糖以及一些离子
、
化学试剂
、
盐等会抑制
β
‑
葡萄糖苷酶的活性，极大地限制了其在工业生产方面的应用
。
生活在极端环境中的微生物能很好的适应一些普通环境来源的微生物所适应不了的条件，如从温泉宏基因组获得的
β
‑
葡萄糖苷酶具有更高的热稳定性和对葡萄糖
、
乙醇的耐受性
、
从海洋细菌
Alteromonas sp.L82
中获得的
β
‑
葡萄糖苷酶具有冷适应性和耐盐性特征
。
大多数能耐受葡萄糖的
β
‑
葡萄糖苷酶是不耐热的，而热稳定性好的
β
‑
葡萄糖苷酶又没能表现出好的葡萄糖耐受性
。
我国是一个农业生产大国，每年产生的秸秆类废弃物很多，加上土地盐碱化程度的加重，这些木质纤维素很难自然降解
。
因此，能够挖掘到具有热稳定性强，耐碱性好
、
耐葡萄糖等性质的
β
‑
葡萄糖苷酶就很重要，这在工业应用
、
环境保护及纤维素生物质加工中具有强大的应用潜力
。
[0004]本研究就是利用宏基因组技术从克拉玛依盐碱地带回的土壤样品中提取总的微生物宏基因组，获得一个新型
β
‑
葡萄糖苷酶功能基因
(b0
‑
bg40)
，对其进行克隆
、
异源表达
、
蛋白质分离纯化和酶学性质探究，最后对其进行分离纯化和酶学性质分析，发现其是一个热稳定性强
、
耐碱性好的
β
‑
葡萄糖苷酶，这为盐环境来源的
β
‑
葡萄糖苷酶的开发和应用提供参考
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了本专利技术的主要目的是提出一种
β
‑
葡萄糖苷酶基因
、
重组载体
、
宿主细胞
、
β
‑
葡萄糖苷酶及其应用，旨在解决现有的
β
‑
葡萄糖苷酶热稳定性和葡萄糖耐受性差的问题，提供一种热稳定性强，
pH
耐受范围广泛以及葡萄糖耐受性强的
β
‑
葡萄糖苷酶以及应用
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种耐盐
β
‑
葡萄糖苷酶，所述
β
‑
葡萄糖苷酶的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示
。
[0008]一种编码权利要求1所述
β
‑
葡萄糖苷酶的
DNA
分子，所述
DNA
分子为
(a)
或
(b)
：
[0009](a)
其核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示；
[0010](b)SEQ ID NO
：2所示核苷酸序列经过替换
、
删除或插入一个或几个核苷酸形成的编码所述
β
‑
葡萄糖苷酶的
DNA
分子
。
[0011]一种重组载体，所述重组载体包括所述
DNA
分子和与所述
DNA
分子可操作地连接的用于表达的调节序列
。
[0012]宿主细胞，所述宿主细胞包括所述
DNA
分子或所述重组载体
。
[0013]所述耐盐
β
‑
葡萄糖苷酶在降解纤维素中的应用
。
[0014]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0015]本专利技术从克拉玛依盐碱地土壤宏基因组中预测到一个新的
β
‑
葡萄糖苷酶功能基因
(b0
‑
bg40)
，通过
PCR
扩增方法获得该基因，对其进行克隆
、
异源表达
、
蛋白质分离纯化和酶学性质探究，发现该酶为一个热稳定性强
、
耐碱性好的
β
‑
葡萄糖苷酶，其在工业生产
、
食品等行业具有广阔的应用前景
。
[0016]b0
‑
bg40
的最适温度和最适
pH
分别为
45℃
和
8.6
，在
20
‑
55℃
保持
60
％以上的相对酶活，
pH 5.6
‑
9.6
时能保持
50
％以上的相对酶活
。b0
‑
bg40
有较强的热稳定性及
pH
稳定性，在
40℃、45℃
孵育
10h
后其活性仍保持在
85
％以上；在
50℃<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种耐盐
β
‑
葡萄糖苷酶，其特征在于，所述
β
‑
葡萄糖苷酶的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示
。2.
一种编码权利要求1所述
β
‑
葡萄糖苷酶的
DNA
分子，其特征在于，所述
DNA
分子为
(a)
或
(b)
：
(a)
其核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示；
(b)SEQ ID NO
：2所示核苷酸序列经过替换...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹以瑞，朱倩，万玲，李林华，吕志华，朱丹，鲜文东，黄裕颖，王妃，郑宏钊，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：