一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的制造技术

本发明专利技术公开了一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的

【技术实现步骤摘要】
一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的SRAP分子标记引物组合及其应用


[0001]本专利技术属于中药材
DNA
分子鉴定及应用的
，更具体地，利用“相关序列扩增多态性
(Sequence
‑
related amplified polymorphism, SRAP)”提供的上
、
下游引物表中分别随机选取若干条（见附表1），自由组合成若干对引物，对“黔藿1号”的
DNA
进行
PCR
扩增，从中筛选出重复性好
、
扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合
。
建立“黔藿1号”区别于淫羊藿属其他物种的特异性条带
。

技术介绍

[0002]中药材淫羊藿
Epimedii folium
是小檗科淫羊藿属植物淫羊藿
Epimedium brevicornu Maxim.、
箭叶淫羊藿
Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim.、
柔毛淫羊藿
Epimedium pubescens Maxim.
或朝鲜淫羊藿
Epimedium koreanum Nakai
的干燥叶，是我国传统大宗药材，其性温
、
味辛
、
甘，归肝
、
肾经，具补肾阳
、
强筋骨
、
祛风湿等功效，临床上主要用于肾阳虚衰
、r/>阳痿遗精
、
筋骨痿软
、
风湿痹痛
、
麻木拘挛等症
。
[0003]“黔藿1号”为贵州省非主要农作物和食用菌品种认定专家委员会中药材专业委员会于
2021
年认定通过的中药材箭叶淫羊藿优良品种，其品质优（叶片总黄酮醇苷含量达到
14.8%
，是目前发现的淫羊藿属植物中总黄酮醇苷含量最高的一个种）
、
产量高（以根段茎繁育的种苗在种植2年后田间产量可达到鲜叶
360 kg/
亩），主要种植于贵州省黔东南
、
黔南一带
。
[0004]小檗科淫羊藿属下有
41
个物种，被历版
《
中国药典
》
收载作为中药材淫羊藿的物种仅有淫羊藿
、
箭叶淫羊藿
、
柔毛淫羊藿和朝鲜淫羊藿4个，巫山淫羊藿被
《
中国药典
》
单独收载
。
淫羊藿属植物野生资源丰富，在我国分布较广，加之淫羊藿属于我国传统大宗药材且下游开发的产品较多，对淫羊藿药材的需求量大，过去主要靠采挖野生资源为主，导致野生资源濒临灭绝状态，同时，因野生资源杂乱，质量参差不齐，导致下游产品质量不稳定，最终疗效不稳定也是必然
。
随着我国中医药事业的发展，中医药必将走出国门，对中药材质量的要求不断提高，药材基源可追溯，种苗繁育
、
种植
、
采收
、
加工
、
包装等环节规范化的文件
、
政策相应出台并实施
。“黔藿1号”属于人工选育出的具备特异性
、
稳定性和一致性的箭叶淫羊藿优良品种，在加工端如何保证所需原料即为“黔藿1号”仍需要一个可操作
、
易于实施的技术手段
。
[0005]为保证中药材箭叶淫羊藿质量稳定
、
临床疗效可靠，需建立一种可明确箭叶淫羊藿优良品种“黔藿1号”基源的鉴别方法，以保护“黔藿1号”的真实性
。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是提供一种鉴定箭叶淫羊藿良种“黔藿1号”的
SRAP
分子标记引物组合及其应用
。
[0007]本专利技术所提供的
SRAP
分子标记引物组合为：
Me18
‑
Em10
正向引物： 5'
‑
TGAGTCCTTTCCGGTCC
‑
3'
，
Me18
‑
Em10
反向引物： 5'
‑
GACTGCGTACGAATTCAT
‑
3'
一种鉴定箭叶淫羊藿良种“黔藿1号”的方法，包括以下步骤：（1）在“相关序列扩增多态性
(Sequence
‑
related amplified polymorphism, SRAP)”提供的上
、
下游引物表中分别随机选取各
18
条，自由组合成
324
对引物，对待测样品的
DNA
进行
PCR
扩增，从中筛选出重复性好
、
扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合；（2）对
PCR
扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，以筛选重复性好
、
扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合
。
[0008]（3）电泳结束后，进行染色
、
显色，并置于
Chemi Doc TM
凝胶成像系统下拍照保存
。
[0009]若聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带显示附图1中的
S1
泳道图，则为“黔藿1号”这个物种，若不是则为其他物种
。
[0010]上述鉴定箭叶淫羊藿“黔藿1号”的方法中，聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂配制方法如下：
20%
过硫酸铵溶液的配制：称取
20 g
过硫酸铵用蒸馏水溶解，并定容至
100 mL
，即可；
8%
聚丙烯酰胺凝胶配制：首先分别加入
32.1 mL 30% Acr
‑
Bis
（
29:1
）
、24 mL 5
×
TBE
缓冲液
、60.25 mL
超纯水
、75
ꢀµ
L PAGE
胶促凝剂，最后加入
750
ꢀµ
L20%
过硫酸铵溶液，搅拌混匀，即得；银染液的配制：称取
0.1 g
硝酸银加入蒸馏水溶解，定容至
1 L
；显色液的配制：称取
20 g
氢氧化钠加入蒸馏水溶解，定容至
1 L
，使用前加入
3 mL
甲醛溶液，即得；上述鉴定箭叶淫羊藿良种“黔藿1号”的方法中，用
8%
非变性聚丙烯酰胺凝胶对扩增产物进行电泳检测，缓冲液为 0.5
×
TBE
，电压（
V
）
=120 V
，电泳时间
90 min。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的
SRAP
分子标记引物组合，其特征在于：所述引物组合：
Me18
‑
Em10
正向引物： 5'
‑
TGAGTCCTTTCCGGTCC
‑
3'
，
Me18
...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪永平，刘红昌，
申请(专利权)人：贵州贵基生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：