一种稳定表达制造技术

本申请涉及医学分子生物学的技术领域，具体公开了一种稳定表达

【技术实现步骤摘要】
一种稳定表达FAM19A5基因的肺癌细胞株及其构建方法和应用


[0001]本申请涉及医学分子生物学的
，更具体地说，涉及一种稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株及其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]肺癌作为全球常见的恶性肿瘤之一，其发病率与致死率居高不下
。
研究分析其主要原因在于该疾患难以早期诊断以及它的高转移性
。
在肺癌的病理型中，非小细胞肺癌（
non
‑
small cell lung cancer
，
NSCLC
）约占肺癌的
85%
，且该病具有早期隐匿性，患者确诊时已属中晚期，错过最佳治疗时期，生存率低
。
为此，肺癌的早期筛查尤为重要
。
[0003]近年来，分子诊断技术由于其无创
、
快速的诊断特点，已成为了癌症筛查的研究热点
。TAFA
趋化因子家族成员5（
FAM19A5
）是由5个编码小分泌蛋白的高度同源基因组成，主要在大脑的特定区域表达，并被认为作为脑特异性趋化因子或神经因子发挥作用，作为免疫和神经细胞的调节因子
。
据研究表明，
FAM19A5
在肺癌患者中表达存在显著异常，但其作用机制尚待深入研究
。

技术实现思路

[0004]本申请提供一种稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株及其构建方法和应用，为进一步研究
FAM19A5
基因在肺癌发生
、
发展
、
治疗及后续耐药过程中提供基本且有力的研究工具
。
[0005]第一方面，本申请提供一种稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株
。
[0006]本申请通过化学合成
FAM19A5
基因并通过
T4
连接酶连接上慢病毒质粒
PCDH
‑
CMV
‑
MCS
‑
EF1
‑
copGFP
‑
T2A
‑
Puro
后转入
293T
细胞完成病毒包装，获得慢病毒溶液
。
随后使用含
10%FBS
的
RPMI1640
培养基，在
37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养人肺癌细胞
H460
，待细胞生长至一定数量时，加入慢病毒溶液感染
24h
后并用嘌呤霉素进行筛选，获得稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株
。
[0007]上述肺癌细胞株已于
2023
年4月
20
日保藏，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（
CGMCC
），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为
CGMCC NO. 45547。
分类命名为靶基因过表达肺癌细胞株
。
[0008]所述肺癌细胞株可以稳定表达
FAM19A5
‑
GFP
融合基因
。
[0009]第二方面，本申请提供上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株的应用
。
[0010]在一个具体的实施方式中，上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在研究肺癌发生
、
发展以及耐药过程以及机制中的应用
。
[0011]在一个具体的实施方式中，上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株作为肺癌早期筛查和
/
或肺癌脑转移机制研究的细胞模型的应用
。
[0012]在一个具体的实施方式中，上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在筛选或预
测肺癌早期筛查和
/
或肺癌脑转移的分子标志物中的应用
。
[0013]在一个具体的实施方式中，上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在制备用于预防或治疗早期肺癌和
/
或肺癌脑转移的药物中的应用
。
[0014]在一个具体的实施方式中，上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在制备用于早期肺癌和
/
或肺癌脑转移风险评估检测试剂盒中的应用
。
[0015]第三方面，本申请提供上述稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株的构建方法
。
[0016]通过化学合成
FAM19A5
基因的序列片段并克隆到载体
PCDH
上，后转入
293T
细胞制备慢病毒溶液；将所述慢病毒溶液感染
H460
细胞
24h
并用嘌呤霉素进行筛选，获得稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株
。
[0017]在一个具体的实施方式中，利用所述慢病毒溶液感染所述
H460
细胞时，感染效果感染效果最佳的感染复数（
MOI
）为
10。
[0018]在一个具体的实施方式中，利用所述慢病毒溶液感染所述
H460
细胞
24h
时，感染效果为
30%。
[0019]在一个具体的实施方式中，利用所述慢病毒溶液感染所述
H460
细胞
24h
时，获得的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株中目标基因
FAM19A5
约为对照组表达量的
1600
倍
。
[0020]第四方面，本申请还提供了一种用于扩增上述肺癌细胞株中
FAM19A5
基因的引物组
。
[0021]具体地，
primer F
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示；
primer R
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示
。
[0022]综上所述，本申请具有以下有益效果：本申请通过慢病毒感染技术，利用
PCDH
‑
CMV
‑
MCS
‑
EF1
‑
copGFP
‑
T2A
‑
Puro
载体感染
H460
细胞，建立稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株
。
利用细胞荧光
、
荧光定量
PCR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株，其特征在于，所述肺癌细胞株的保藏编号为
CGMCC NO. 45547。2.
根据权利要求1所述的肺癌细胞株，其特征在于，所述肺癌细胞株可以稳定表达
FAM19A5
‑
GFP
融合基因
。3.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在研究肺癌发生
、
发展以及耐药过程以及机制中的应用
。4.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株作为肺癌早期筛查和
/
或肺癌脑转移机制研究的细胞模型的应用
。5.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在筛选或预测肺癌早期筛查和
/
或肺癌脑转移的分子标志物中的应用
。6.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在制备用于预防或治疗早期肺癌和
/
或肺癌脑转移的药物中的应用
。7.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株在制备用于早期肺癌和
/
或肺癌脑转移风险评估检测试剂盒中的应用
。8.
一种权利要求1所述的稳定表达
FAM19A5
基因的肺癌细胞株的...

【专利技术属性】
技术研发人员：何国鼎，林彦丞，郭雅萍，吴泽祥，傅小颖，杨华丽，
申请(专利权)人：泉州高品医学检验实验室有限责任公司，
类型：发明
国别省市：