一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其用于同时检测分析样品中氯霉素

【技术实现步骤摘要】
一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法


[0001]本专利技术属于水产品中兽药残留检测
，具体涉及一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法
。

技术介绍

[0002]酰胺醇类药物（
APs
）已被广泛应用于日趋规模化和集约化的养殖业，酰胺醇类药物（
APs
）包括氯霉素（
CAP
）
、
甲砜霉素（
TAP
）
、
氟苯尼考（
FF
）
、
棕榈氯霉素（
CAPP
）
、
琥珀氯霉素（
CAPS
）及其代谢物氟苯尼考胺（
FFA
）
。APs
属抑菌性广谱抗生素，能对多种细菌微生物产生作用，常用于对水生动物各种传染病的治疗，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也造成了水产品中严重的残留问题
。
因
APs
会引起人类的再生障碍性贫血
、
粒细胞缺乏症
、
急性白血病
、
新生儿灰婴综合症等严重毒副作用，作为渔药已禁用
。
己烯雌酚（
DES
）为人工合成的非甾体雌激素，对水生动物有提高繁育率等作用，但人食用了残留有
DES
的水产品后会造成体内激素失调，对人体健康产生危害，作为渔药也已禁用
。
因此对水产品中
APs
和/>DES
的检测对于食品安全有重要意义
。
[0003]通常用于上述7种药物的主要分析手段有酶联免疫吸附法
、
气相色谱
‑
质谱法
、
高效液相色谱法及高效液相色谱串联质谱法（
LC
‑
MS/MS
），其中气相色谱
‑
质谱法和
LC
‑
MS/MS
为确证方法
。
气相色谱
‑
质谱法需要复杂的衍生化步骤，而
LC
‑
MS/MS
的前处理则相对简单
。
但是目前对于
APs
和
DES
单个药物或仅包括其中一种类型的药物残留分析方法较多，尚未见有7种药物同时分析的报道，为满足日益增多的检测需求和提高检测效率，有必要建立上述7种药物在水产品中的同时检测方法
。

技术实现思路

[0004]针对上述不足，本专利技术公开了一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，建立了水产品中
APs
和
DES
同时分析的
LC
‑
MS/MS
方法，方法准确
、
灵敏，能满足水产品中这7种药物定量分析的需要，而且可通过一次前处理同时提取7种目标残留物，使操作更为简单，大幅度提高工作效率，实现大批量样品中
APs
和
DES
残留量的快速定量分析
。
[0005]本专利技术是采用如下技术方案实现的：一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其包括以下步骤：（1）配制混合标准工作溶液：称取
CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS、FFA
和
DES
的标准物质，用甲醇分别配制得到浓度为
100
µ
g/mL
的单标储备液，移取
CAP
和
DES
的单标储备液各
50
µ
L
以及
FF、FFA、TAP、CAPS
和
CAPP
的单标储备液各
250
µ
L
置于
50mL
棕色容量瓶中，再用甲醇水溶液定容，混合均匀后得到混合标准工作溶液，接着从混合标准工作溶液中分别移取
50
µ
L、100
µ
L、200
µ
L、500
µ
L、1000
µ
L、2000
µ
L、5000
µ
L
的混合标准工作溶液于一系列
10mL
容量瓶中，配制成
CAP
和
DES
的浓度为
0.5
µ
g/L、1.0
µ
g/L、2.0
µ
g/L、5.0
µ
g/L、10.0
µ
g/L、20.0
µ
g/L、50.0
µ
g/L
，
FF、FFA、TAP、CAPS
和
CAPP
的浓度为
2.5
µ
g/L、5.0
µ
g/L、10.0
µ
g/L、25.0
µ
g/L、50.0
µ
g/L、100.0
µ
g/L、250.0
µ
g/L
的系列标准工作曲线溶液；
（2）样品处理：取水产品的组织置于捣碎机中捣碎再均质后得到待测试的试样品，称取
4.95
～
5.05g
的试样品置于离心管中进行提取处理；所述提取处理的程序为先向离心管中加入
15
～
30mL
氨化乙酸乙酯后振荡提取8～
15min
，然后在
4000r/min
的条件下离心5～
10min
，吸取氨化乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱后置于蒸发管中；接着将装有样品残渣的离心管按照提取处理的程序重复提取一次，合并氨化乙酸乙酯提取液并减压蒸发至干得到浓缩残渣；向装有浓缩残渣的蒸发管中依次加入
1mL
水和
5mL
正己烷溶解浓缩残渣，然后漩涡混匀
1min
；将溶解液转移到具塞玻璃离心管中，再在
8000r/min
的条件下离心
5min
，弃去上层正己烷后再加入
5mL
正己烷，并且漩涡混匀
1min
后在
8000r/min
的条件下离心
5min
，弃去上层正己烷溶液得到水相，再将水相经过滤膜处理后得到待测样；（3）取步骤（1）中得到的系列标准工作曲线溶液依次进行
LC
‑
MS/MS
测定并绘制标准工作曲线；取步骤（2）中得到的待测样进行
LC
‑
MS/MS
测定，根据以下公式计算待测样中
CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS、FFA
和
DES
的含量：
X=本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）配制混合标准工作溶液：称取
CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS、FFA
和
DES
的标准物质，用甲醇分别配制得到浓度为
100
µ
g/mL
的单标储备液，移取
CAP
和
DES
的单标储备液各
50
µ
L
以及
FF、FFA、TAP、CAPS
和
CAPP
的单标储备液各
250
µ
L
置于
50mL
棕色容量瓶中，再用甲醇水溶液定容，混合均匀后得到混合标准工作溶液，接着从混合标准工作溶液中分别移取
50
µ
L、100
µ
L、200
µ
L、500
µ
L、1000
µ
L、2000
µ
L、5000
µ
L
的混合标准工作溶液于一系列
10mL
容量瓶中，配制成
CAP
和
DES
的浓度为
0.5
µ
g/L、1.0
µ
g/L、2.0
µ
g/L、5.0
µ
g/L、10.0
µ
g/L、20.0
µ
g/L、50.0
µ
g/L
，
FF、FFA、TAP、CAPS
和
CAPP
的浓度为
2.5
µ
g/L、5.0
µ
g/L、10.0
µ
g/L、25.0
µ
g/L、50.0
µ
g/L、100.0
µ
g/L、250.0
µ
g/L
的系列标准工作曲线溶液；（2）样品处理：取水产品的组织置于捣碎机中捣碎再均质后得到待测试的试样品，称取
4.95
～
5.05g
的试样品置于离心管中进行提取处理；所述提取处理的程序为先向离心管中加入
15
～
30mL
氨化乙酸乙酯后振荡提取8～
15min
，然后在
4000r/min
的条件下离心5～
10min
，吸取氨化乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱后置于蒸发管中；接着将装有样品残渣的离心管按照提取处理的程序重复提取一次，合并氨化乙酸乙酯提取液并减压蒸发至干得到浓缩残渣；向装有浓缩残渣的蒸发管中依次加入
1mL
水和
5mL
正己烷溶解浓缩残渣，然后漩涡混匀
1min
；将溶解液转移到具塞玻璃离心管中，再在
8000r/min
的条件下离心
5min
，弃去上层正己烷后再加入
5mL
正己烷，并且漩涡混匀
1min
后在
8000r/min
的条件下离心
5min
，弃去上层正己烷溶液得到水相，再将水相经过滤膜处理后得到待测样；（3）取步骤（1）中得到的系列标准工作曲线溶液依次进行
LC
‑
MS/MS
测定并绘制标准工作曲线；取步骤（2）中得到的待测样进行
LC
‑
MS/MS
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄鸾玉，吴祥庆，蒙源，江林源，林勇，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：