一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽及其应用。所述抗菌肽的序列如SEQ ID NO:1所示。该抗菌肽不仅制备简单和细胞毒性较低，而且能非特异性靶向抑制致病菌，而不影响益生菌的正常生长，适用于制备抑菌剂，如用于制备口腔用品，调节口腔微生态的平衡，进而用于防治口腔疾病，尤其是防治龋病、牙周炎、口腔黏膜病或口腔癌等疾病。而且，本发明专利技术的抗菌肽长度较短，化学合成难度小，可直接合成为高纯产物，同时效果明确，应用广泛。应用广泛。应用广泛。

【技术实现步骤摘要】
一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽及其应用


[0001]本专利技术属于抗菌肽
更具体地，涉及一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽及其应用。

技术介绍

[0002]天蚕素A是一种抗菌肽，由37个氨基酸残基组成，分子质量约为4kDa。不同于传统抗生素，天蚕素A能够通过靶向抑制各种生物分子合成、破坏或渗透靶细胞质膜，以及靶向作用代谢酶等多种方式杀死病原菌或抑制病原菌的生长。此外，天蚕素A还可以破坏细菌细胞膜的物理完整性，而细菌耐药性又与自身生物膜有着密切联系，因此天蚕素A不易产生细菌耐药性问题。
[0003]目前，天蚕素A主要获取途径为从生物体内提取纯化，存在来源受限和细胞毒性较高等问题(Reddy K V R,Yedery R D,Aranha C.Antimicrobial peptides:premises and promises[J].International journal of antimicrobial agents,2004,24(6):536
‑
547.)，这也导致了天蚕素A的应用受限。
[0004]因此，亟需对天蚕素A进行改造，以拓宽其来源、降低其细胞毒性。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术的不足，旨在提供一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽，由天蚕素A改造而来，细胞毒性显著降低。
[0006]本专利技术的第一目的是提供一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽。
[0007]本专利技术的第二目的是提供与上述抗菌肽具有90％以上同源性的多肽。
[0008]本专利技术的第三目的是提供将上述抗菌肽的N端进行乙酰化修饰得到的多肽。
[0009]本专利技术的第四目的是提供上述抗菌肽或多肽在制备抑菌剂中的应用。
[0010]本专利技术的第五目的是提供上述抗菌肽或多肽在制备口腔用品中的应用。
[0011]本专利技术的第六目的是提供一种口腔用品。
[0012]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0013]本专利技术首次发现序列如SEQ ID NO:1所示的抗菌肽不仅制备简单和细胞毒性均较低，而且能非特异性靶向抑制致病菌，而不影响益生菌的正常生长。因此，本专利技术提供了序列如SEQ ID NO:1所示的非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽、与上述抗菌肽具有90％以上同源性的多肽、将上述抗菌肽的N端进行乙酰化修饰得到的多肽、上述抗菌肽或多肽在制备抑菌剂中的应用，以及上述抗菌肽或多肽在制备口腔用品中的应用。
[0014]所述抗菌肽包括37个氨基酸，分子量为3911.69，分子式为C
178
H
305
N
51
O
47
，总平均亲水性为
‑
0.349。
[0015]本专利技术提供的抗菌肽具有非特异性靶向抑制致病菌的特点，其中，非特异性指代该抗菌肽具备同时抑制多种致病菌的特点，靶向指代该抗菌肽可以选择性抑制致病菌但不抑制益生菌。
[0016]优选地，所述口腔用品具有治疗和/或预防口腔疾病的作用。
[0017]进一步优选地，所述口腔疾病为口腔致病菌引发的口腔疾病，所述口腔致病菌如牙龈卟啉单胞菌、变异链球菌、伴放线放线杆菌、具核梭杆菌、中间普氏菌、齿垢密螺旋体、福赛坦纳菌、粘性放线菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。
[0018]在口腔中，若微生态失衡，其微生物群体容易转化为病原体的相关群体，对口腔健康带来负面影响；同时，致病菌的增加易使口腔产生异味(口臭)，进而导致龋病、牙周炎、口腔黏膜病或口腔癌等疾病的发生，而本专利技术上述抗菌肽或多肽能非特异性靶向抑制致病菌，且不影响益生菌的正常生长，进而有效调节口腔微生态的平衡，因此，含有上述抗菌肽或多肽的口腔用品均应在本专利技术的保护范围之内。
[0019]优选地，所述口腔用品为牙膏、漱口水、漱口水泡腾片或口腔护理液中的一种或几种。
[0020]本专利技术具有以下有益效果：
[0021]本专利技术的抗菌肽不仅制备简单和细胞毒性较低，而且能非特异性靶向抑制致病菌，而不影响益生菌的正常生长，适用于制备抑菌剂，如用于制备口腔用品，调节口腔微生态的平衡，进而用于防治口腔疾病，尤其是防治龋病、牙周炎、口腔黏膜病或口腔癌等疾病。而且，本专利技术的抗菌肽长度较短，化学合成难度小，可直接合成为高纯产物，同时效果明确，应用广泛。
附图说明
[0022]图1为乙酰化抗菌肽的HPLC图谱。
[0023]图2为乙酰化抗菌肽的LCMS图谱。
具体实施方式
[0024]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0025]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0026]实施例1非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽的制备
[0027]将天蚕素A(如SEQ ID NO:2所示：KWKLFKKIEKVGQNIRDGIIKAGPAVAVVGQATQIAK)N端的2号氨基酸更换为赖氨酸(K)，将其C端的34～36号氨基酸更换为3个脯氨酸(P)，37号氨基酸更换为1个天冬酰胺(N)，即得到本专利技术的抗菌肽序列：KKKLFKKIEKVGQNIRDGIIKAGPAVAVVGQATPPPN(如SEQ ID NO:1所示)。
[0028]委托上海药明康德新药开发有限公司通过蛋白质化学合成方法(脱水缩合)合成上述抗菌肽(如SEQ ID NO:1所示)，且为了提高本专利技术抗菌肽在下述测试例中的稳定性，还将该抗菌肽N端的第一个赖氨酸(K)进行乙酰化修饰，得到的乙酰化抗菌肽基本理化性质如下表1所示。
[0029]表1乙酰化抗菌肽的基本理化性质
[0030]氨基酸数量37分子量3911.69
理论等电点10.39分子式C
178
H
305
N
51
O
47
带负电残基的总数(Asp+Glu)2带正电残基的总数(Arg+Lys)8不稳定指数28.97<40.00，归类为稳定蛋白质脂肪系数94.86(稳定性好)总平均亲水性
‑
0.349(亲水蛋白，溶于水)
[0031]再对上述乙酰化抗菌肽进行HPLC分析和LCMS分析。分析结果如图1和图2所示，可见，乙酰化抗菌肽的纯度为96.7％，分子量为3953.68。
[0032]测试例1溶血性评价
[0033]本测试例的溶血性评价实验参照《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行。具体评价方法如下：取家兔心脏血20mL，放入盛有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇10min，除去纤维蛋白原，使成脱纤维血，加10倍体积量的0.9wt％氯化钠溶液，摇匀，1500r/min离心10min，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9wt％氯化钠溶液洗涤至离心后上清液不显红色为止，将所得红细胞按体积用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非特异性靶向抑制致病菌的抗菌肽，其特征在于，序列如SEQ IDNO:1所示。2.与权利要求1所述抗菌肽具有90％以上同源性的多肽。3.将权利要求1所述抗菌肽的N端进行乙酰化修饰得到的多肽。4.权利要求1所述抗菌肽或权利要求2～3任一所述多肽在制备抑菌剂中的应用。5.权利要求1所述抗菌肽或权利要求2～3任一所述多肽在制备口腔用品中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述口腔用品具有治疗和/或预防口腔疾病的作用。7.根据权利要求6所述应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李毅苹，王伟光，孟杨，王梓鉴，黎燕华，
申请(专利权)人：好易康生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：