一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法，所述方法根据美洲钩虫

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法


[0001]本专利技术涉及分子检测
，具体涉及一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法
。

技术介绍

[0002]钩虫
(Hookworm)
属圆线虫目钩口科，成虫寄生于宿主小肠，人或哺乳动物为其主要终末宿主
。
虫卵随宿主排便排出体外，在温
、
湿度
、
含氧量适宜的土壤环境中经2次蜕皮发育为感染期幼虫丝状蚴，经皮肤接触侵入宿主体内引发钩虫感染
。
常发生于人在没有相应防护措施赤手裸足在田地间劳作，接触被丝状蚴污染的土壤时，由于丝状蚴具有明显的向温
、
向湿性，在与宿主皮肤接触后，虫体活动力显著增强，常经足趾或手指间皮肤薄嫩处侵入宿主体内，引发钩蚴性皮炎，有痒感及烧灼感，俗称“粪毒”、“地痒疹”。
钩虫侵入宿主体内后，展开一系列移行活动，经2次蜕皮最终发育为成虫，成虫以其钩齿或板齿咬附宿主肠壁，以吞食宿主血液
、
淋巴液为主要营养来源，导致宿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法，其特征在于，根据美洲钩虫
ITS
基因片段，设计并筛选出一对特异性
RPA
引物和一条探针，构建美洲钩虫荧光
RPA
反应体系，进行荧光
RPA
检测，包括以下步骤：
S1、
根据美洲钩虫
ITS
基因片段设计如下所示的特异性
RPA
引物及探针：上游引物：
CTACAGTGTAGCTTGTGGACAGTACTCTCACCG
，如
SEQ ID NO:1
所示；下游引物：
CGATTAAACAGTGAACAACGATATGTTCATGTC
，如
SEQ ID NO:2
所示；探针：
CTGTTATTCACTACGTTAGTTRGCTAGTT/i6FAMdT//idSp/C/iBHQdT/AACGTATGATA GCG
‑
C3 Spacer
，如
SEQ ID NO:3
所示；
S2、
提取待测样本中的基因组
DNA
，得到
DNA
模板；
S3、
荧光
RPA
反应体系的构建：向含酶冻干粉的反应管中加入缓冲液
、
上游引物
、
下游引物
、
探针
、DNA
模板和去离子水，使酶冻干粉充分溶解
、
混匀，运用迷你离心机
12000rpm/min
离心
10s
后，将反应管中的混合液转移至检测管中，在所述检测管的管盖中加入醋酸镁溶液并离心；其中，所述酶冻干粉包括重组酶蛋白
UvsX、DNA
聚合酶
、
单链结合蛋白
、dNTP
及核酸外切酶Ⅲ；
S4、
荧光
RPA
检测：将构建好的荧光
RPA
反应体系，放置于荧光定量
PCR
仪中，进行荧光
RPA
检测
。2.
根据权利要求1所述的基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法，其特征在于，所述美洲钩虫
ITS
基因片段为
Genbank
中美洲钩虫
ITS2
基因
。3.
根据权利要求1所述的基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫的方法，其特征在于，所述荧光
RPA
反应体系共
50
μ
L
，所述荧光
RPA
反应体系包含：所述上游引物
2.1
μ
L、
所述下游引物
2.1
μ
L...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑彬，徐斌，梁家瑞，胡薇，沈玉娟，薛剑，霍乐乐，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：