一种基于制造技术

本发明专利技术提供一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas12a
‑
RPA快速检测草地贪夜蛾的序列组合及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，尤其涉及一种基于
CRISPR/Cas12a
‑
RPA
快速检测草地贪夜蛾的序列组合及其应用，具体地是一种基于
CRISPR/Cas12a
‑
RPA
快速检测草地贪夜蛾的序列组合
、
检测试剂盒
、
检测方法和应用
。

技术介绍

[0002]草地贪夜蛾（
Spodoptera frugiperda
）别名又叫秋粘虫，最初分布在美洲热带和亚热带地区，是美洲的本地物种，它于
2016
年初在西部和中部非洲首次被发现，现已成为许多非洲和亚洲国家最严重的入侵鳞翅目害虫之一（
Sparks et al 1979
；陆耀辉等
2023
）
。
草地贪夜蛾是一种多食性迁徙性害虫，由于其出色的飞行能力，可以利用季节性风或台风进行长距离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
CRISPR/Cas12a
‑
RPA
快速检测草地贪夜蛾的序列组合，其特征在于，包括根据
COI
基因设计的
RPA
引物对序列和
crRNA
序列，
RPA
引物对序列为：正向引物
RPA
‑
COI
‑
F1
的序列如
SEQ ID NO
：1所示；反向引物
RPA
‑
COI
‑
R2
的序列如
SEQ ID NO
：2所示；
crRNA
序列如
SEQ ID NO
：3所示
。2.
根据权利要求1所述的一种基于
CRISPR/Cas12a
‑
RPA
快速检测草地贪夜蛾的序列组合，其特征在于，所述序列组合还包括
ssDNA
探针序列；所述
ssDNA
探针序列是用于荧光定量
PCR
仪器检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列
、
用于可视化荧光检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列或用于侧流层析试纸条检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列
。3.
根据权利要求2所述的一种基于
CRISPR/Cas12a
‑
RPA
快速检测草地贪夜蛾的序列组合，其特征在于，用于荧光定量
PCR
仪器检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列为
ssDNA
‑
reporter
‑
FAM
或
ssDNA
‑
reporter
‑
CY5
；其中，
ssDNA
‑
reporter
‑
FAM
为：5’‑6’
FAM
‑
TTATT
‑
BHQ1
‑3’
；
ssDNA
‑
reporter
‑
CY5
为：5’‑
CY5
‑
TGTCTTATcccccATAAGACA
‑
BHQ1
‑3’
；用于可视化荧光检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列为
ssDNA
‑
reporter
‑
FAM
‑2，具体为：5’‑6’
FAM
‑
TGTCTTATcccccATAAGACA
‑
BHQ1
‑3’
；用于侧流层析试纸条检测的草地贪夜蛾的
ssDNA
探针序列为
FB
‑
reporter
，具体为：5’‑6’
FAM
‑
TTTTTTTTT
‑
Biotin
‑3’
。4.
一种快速检测草地贪夜蛾的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1‑3中任一项所述的
RPA
引物对序列和
crRNA
序列
。5.
根据权利要求4所述的一种快速检测草地贪夜蛾的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含水合
Buffer、MgOAC、
酶干粉
、Cas12a
酶和
ddH2O。6.
根据权利要求4或5所述的一种快速检测草地贪夜蛾的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于进行
RPA
扩增反应的反应体系和用于进行
CRISPR/Cas12a
反应的体系；用于进行
RPA
扩增反应的反应体系的总体积为
50
μ
L
，反应体系包括：正向引物
RPA
‑
COI
‑
F1、
反向引物
RPA
‑
COI
‑
R2、
水合
buffer、ddH2O
和模板
DNA
，混匀后迅速放入含有酶干粉的
PCR
反应管中，将酶干粉溶解后，最后加入
MgOAC
；用于进行
CRISPR/Cas12a
反应的体系总体积为
20
μ
L
，所述体系选自如下任一种：所述体系包括：
SF
缓冲液
、crRNA
序列
、RNA
酶抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵辉，张金鑫，胡帅，杜晓希，纪长绵，贾瑞宗，张雨良，郭安平，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院三亚研究院，
类型：发明
国别省市：