一种戊糖片球菌的分离方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其是涉及一种戊糖片球菌的分离方法及其应用，一种戊糖片球菌ZZ61的分离方法，所述戊糖片球菌分离于发酵牛乳；分离得到的戊糖片球菌ZZ61在家蚕饲养方面的应用。本发明专利技术公开的戊糖片球菌ZZ61，其能够提高家蚕肠道消化酶活性，具有促进家蚕生长及提高产丝量的用途；另外，该菌株还能够在家蚕肠道内长时间定植，可持续发挥益生作用；本发明专利技术公开的戊糖片球菌ZZ61，属于可食用的菌种，可作为益生菌制剂添加到人工饲料中或喷涂于桑叶表面，促进家蚕健康及经济性状，有利于养蚕业的发展。养蚕业的发展。养蚕业的发展。

【技术实现步骤摘要】
一种戊糖片球菌的分离方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种戊糖片球菌的分离方法及其应用。

技术介绍

[0002]家蚕(Bombyx mori)是一种重要的经济昆虫，蚕丝作为其经济产物，有着越来越多的用途，尤其是近年来在生物医学及生物
越来越受到重视。然而养蚕业中一直存在叶丝转化率低和蚕病发生率高等问题，严重制约了产业的高质量发展。因此，通过多种渠道促进家蚕健康，提高叶丝转化率，提高茧丝的产量与质量，是蚕业生产上长期面临的重大问题。
[0003]肠道微生物与宿主的功能关系是一个新兴、热点的研究领域。近年来，随着对人类肠道微生物与健康研究的深入，包括家蚕在内的昆虫肠道微生物的功能研究也逐渐增加。研究发现肠道微生物在昆虫的营养代谢、生长发育、免疫调节、抗病性、抗药性等方面发挥着重要作用。因此，有针对性地筛选肠道益生菌，并加工成微生态制剂添加于饲料中，用于促进动物健康及提高经济性状，同时也有利于生产上减少抗生素的使用，具有重要意义。
[0004]关于家蚕肠道微生物的研究虽然有了一定的进展，但是目前多集中于初步揭示家蚕肠道菌群的组成以及环境因素对肠道微生态的影响，而筛选特定的应用于促进家蚕生长、健康及产丝量的益生菌的研究还非常少，尤其是关于戊糖片球菌对家蚕的益生作用研究更少。
[0005]本专利技术提供了戊糖片球菌ZZ61的分离方法及在家蚕饲养方面的应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的之一在于提供一种戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus ZZ61；目的之二在于提供该益生菌在促进家蚕生长及提高产丝量方面的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种戊糖片球菌，所述戊糖片球菌序列已提交至GenBank，序列号为OP936130。
[0009]一种戊糖片球菌，所述戊糖片球菌分离于发酵牛乳。
[0010]进一步的，所述酸乳为自然发酵的纯牛乳。
[0011]一种戊糖片球菌的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：
[0012]1)采自牧民家庭的发酵牛乳，用灭菌PBS进行10倍法梯度稀释后分别取100μL涂布于含0.3％碳酸钙的MRS固体平板上，在37℃环境下进行培养；
[0013]2)经过步骤1后长出的菌落中挑选具有溶解圈且形态明显不同的单菌落继续划线于MRS平板，直到得到纯的菌株，并对菌株进行革兰氏染色及形态观察；
[0014]3)将步骤2中纯化后的菌株分别接种于液体MRS培养基中进中行培养并提取基因组DNA，通过16S rRNA序列进行种属的鉴定。
[0015]进一步的，所述步骤1的培养时间为48h。
[0016]进一步的，所述步骤3的鉴定步骤如下：
[0017]1)用细菌通用引物27F和1492R扩增16S rRNA序列，送公司测序；
[0018]2)将得到的序列提交至NCBI进行BLAST比对，其中一株菌与数据库中的戊糖片球菌具有99％以上的同源性，则将该菌株鉴定为戊糖片球菌ZZ61。
[0019]戊糖片球菌在肠道方面的应用。
[0020]戊糖片球菌在促进宿主生长发育及营养代谢方面的应用。
[0021]戊糖片球菌作为乳酸菌的一种，是片球菌属的革兰氏阳性菌，2014年已被批准为新食品原料，属于可食用的菌种之一，因此具有安全性。戊糖片球菌应用于发酵食品的生物防腐剂已有悠久的历史，近年来，也显示出了良好的抗炎、抗氧化、拮抗病原微生物等益生作用。
[0022]进一步的，戊糖片球菌ZZ61在家蚕饲养时采用4龄蚕。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0024](1)本专利技术公开的戊糖片球菌ZZ61，其能够提高家蚕肠道消化酶活性，具有促进家蚕生长及提高产丝量的用途；另外，该菌株还能够在家蚕肠道内长时间定植，可持续发挥益生作用；
[0025](2)本专利技术公开的戊糖片球菌ZZ61，属于可食用的菌种，可作为益生菌制剂添加到人工饲料中或喷涂于桑叶表面，促进家蚕健康及经济性状，有利于养蚕业的发展。
附图说明
[0026]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。
[0027]在附图中：
[0028]图1为戊糖片球菌ZZ61促进家蚕肠道消化酶活性的数据。
[0029]图2为戊糖片球菌ZZ61促进家蚕生长的数据。
[0030]图3为戊糖片球菌ZZ61促进家蚕产丝量的数据。
[0031]图4为戊糖片球菌ZZ61在家蚕肠道定植的数据。
具体实施方式
[0032]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0033]本专利技术提供以下技术方案:
[0034]实施例1：戊糖片球菌ZZ61的来源
[0035]戊糖片球菌ZZ61由本实验室从新疆牧民家庭的传统酸乳中分离保存，包括以下步骤，
[0036](1)采自牧民家庭的传统酸乳，该酸乳为自然发酵的纯牛乳，用灭菌PBS进行10倍法梯度稀释后分别取100μL涂布于含0.3％碳酸钙的MRS固体平板上，37℃培养48h。
[0037](2)从步骤(1)长出的菌落中挑选具有溶解圈且形态明显不同的单菌落继续划线于MRS平板，直到得到纯的菌株，并对菌株进行革兰氏染色及形态观察。
[0038](3)将步骤(2)中纯化后的菌株分别接种于液体MRS培养基中进行培养并提取基因组DNA，通过16S rRNA序列进行种属的鉴定。具体方法为：用细菌通用引物27F和1492R扩增16S rRNA序列，送公司测序。将得到的序列提交至NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)进行BLAST比对，其中一株菌与数据库中的戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus具有99％以上的同源性，则将该菌株鉴定为戊糖片球菌ZZ61。16S rRNA部分序列已提交至GenBank，序列号为OP936130，具体的序列查询信息网址为：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/OP936130.1/。
[0039]戊糖片球菌ZZ61在具有促进肠道消化酶活性方面的应用。
[0040]戊糖片球菌ZZ61，具有促进家蚕生长的用途。
[0041]戊糖片球菌ZZ61，具有促进家蚕产丝量的用途。
[0042]戊糖片球菌ZZ61，其特征在于能够在家蚕肠道长期定植。
[0043]戊糖片球菌ZZ61，其特征在于包含菌液或冻干粉。
[0044]戊糖片球菌ZZ61在养蚕业中的应用。
[0045]戊糖片球菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种戊糖片球菌，其特征在于：所述戊糖片球菌序列已提交至GenBank，序列号为OP936130。2.一种戊糖片球菌，其特征在于：所述戊糖片球菌分离于酸乳。3.根据权利要求2所述的一种戊糖片球菌，其特征在于：所述酸乳为自然发酵的纯牛乳。4.一种戊糖片球菌的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：1)采自牧民家庭的传统牛乳，用灭菌PBS进行10倍法梯度稀释后分别取100μL涂布于含0.3％碳酸钙的MR...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾珠，代方银，童晓玲，彭泓霖，乔英杰，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：