一种大肠杆菌制造技术

本发明专利技术涉及母乳低聚糖生产技术领域，具体涉及一种大肠杆菌（

【技术实现步骤摘要】
一种大肠杆菌K
‑
12 MG1655 BLBYZT6及其应用


[0001]本专利技术涉及母乳低聚糖生产
，具体涉及一种大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
及其应用
。

技术介绍

[0002]2’‑
岩藻糖基乳糖（
2'
‑
FL
）是由
D
‑
葡萄糖
、D
‑
半乳糖和
L
‑
岩藻糖构成，是人乳寡糖中含量最丰富的低聚糖，在人乳中浓度约为2‑
5g/L
，约占已检出的人乳总寡糖的
30%。
人乳寡糖是婴儿发育不可或缺的成分，有助于婴儿肠道中双歧杆菌属
、
乳杆菌属和拟杆菌属等益生菌的生长，有助于预防病原菌感染，调节免疫系统，促进婴儿大脑早期发育等功能
。
[0003]2’‑
FL
已在国外婴幼儿配方奶粉
、
乳制品和特殊用途食品中广泛使用
。
目前，国内外对2’‑
FL
的研究主要集中在微生物发酵法生产2’‑
FL
的菌株构建上，如：
CN114774343A
公开了一种生产2’‑
岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株及应用，通过
CRISPR/Cas9
基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，将不同的酶分别进行基因组过表达或者质粒过表达的调控，最终构建的大肠杆菌工程菌株
3L
发酵罐条件下2’‑
岩藻糖基乳糖发酵产率
57.7g/L。
[0004]CN114032261A
公开了一种降解发酵液中乳糖获得高纯度岩藻糖基乳糖的方法，累计通过了三次膜处理，以去除菌体和杂糖，膜过滤过程加入了重量4‑6倍的水稀释料液；处理过程为降低乳糖含量，加入乳糖酶降解乳糖；离子交换脱盐处理截留浓液电导＜
400us/cm
，最终制备2’‑
岩藻糖基乳糖纯度不低于
95%。
[0005]CN105814070A
公开了使用模拟移动床色谱纯化中性人乳寡糖的方法，模拟移动床色谱柱对含人乳寡糖的发酵提取液进行一次或多次色谱分离，然后喷雾干燥后得到纯度
92%
以上的2’‑
岩藻糖基乳糖
。
[0006]CN202110115032.6
公开了一种2’‑
岩藻糖基乳糖的富集纯化方法，提纯步骤为过滤发酵液
、
低温加压浓缩发酵液
、
无水乙醇沉淀离心除蛋白
、
低温低压浓缩
、
活性炭层析柱预处理
、
层析纯化2’‑
岩藻糖基乳糖
、
低温减压浓缩
、
冷冻干燥得成品，成品色谱纯度
85.04%。
[0007]上述专利的缺陷在于，转化率低，非目标糖干物质占比高，不利于分离纯化；同时对于2’‑
FL
发酵液的分离纯化研究较少，且工艺路线较长，设备复杂
。
[0008]二岩藻糖基乳糖（
DFL
）是一种存在于2’‑
岩藻糖基乳糖产品中的低聚糖，含量较低，具有多种生物活性，包括益生元作用
、
抗粘附性能和免疫调节功能，可作为人乳寡糖标准品，现有技术中一般采用合成的方式制备，产率低和产品纯化困难，现有技术中未见有发酵生产2’‑
岩藻糖基乳糖联产二岩藻糖基乳糖的报道
。

技术实现思路

[0009]针对现有技术转化率低
、
工艺流程长等问题，本专利技术提供一种大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
及其应用，提高了2’‑
岩藻糖基乳糖产率，降低非目标产物干物质占比，分
离纯化流程简单，更利于工业化生产，同时可联产纯度
90%
以上的二岩藻糖基乳糖（
DFL
）
。
[0010]第一方面，本专利技术提供一种大肠杆菌（
Escherichia coli
）
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
，该大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.28317
，保藏日期为
2023
年
08
月
31
日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
。
领域内公知，大肠杆菌（
Escherichia coli
），又名大肠埃希氏菌，由
Escherich
在
1885
年发现
。
[0011]进一步的，大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
的培养方法为，将菌株接种于种子液培养基上，在温度为
36~38℃、
搅拌速率为
150~250r/min
条件下发酵培养
5~10h
；种子液培养基按如下浓度的成分配制：复配蛋白胨 8
～
14g/L、
酵母粉 4
～
12g/L、
氯化钠 8
～
12g/L
；复配蛋白胨包括重量比为
2~3
：1的胰蛋白胨和牛骨蛋白胨
。
[0012]第二方面，本专利技术提供大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
的应用，该应用为，在发酵生产2’‑
岩藻糖基乳糖及二岩藻糖基乳糖中的应用
。
[0013]进一步的，发酵生产2’‑
岩藻糖基乳糖及二岩藻糖基乳糖的方法包括如下步骤：（1）将大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
接种于种子液培养基，获得种子液；（2）将种子液接种于发酵培养基进行发酵，获得发酵液；（3）发酵液经膜过滤
、
浓缩
、
乙酸结晶
、
离心后固形物干燥得2’‑
岩藻糖基乳糖晶体，乙酸结晶分离液经脱色
、
离子交换
、
浓缩
、
色谱分离
、
干燥后得二岩藻糖基乳糖
。
[0014]进一步的，步骤（2）中，发酵培养基按如下浓度的成分配制：葡萄糖 5~40g/L、
乳糖 5~40g/L、
复配蛋白胨 10
～
15g/L、
酵母粉 20
～
30g/L、<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
，其特征在于，该大肠杆菌（
Escherichia coli
）
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.28317
，保藏日期为
2023
年
08
月
31
日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
。2.
如权利要求1所述的大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
，其特征在于，大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
的培养方法为，将菌株接种于种子液培养基上，在温度为
36~38℃、
搅拌速率为
150~250r/min
条件下发酵培养
5~10h
；种子液培养基按如下浓度的成分配制：复配蛋白胨 8
～
14g/L、
酵母粉 4
～
12g/L、
氯化钠 8
～
12g/L
；复配蛋白胨包括重量比为
2~3
：1的胰蛋白胨和牛骨蛋白胨
。3.
一种权利要求1所述大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
的应用，其特征在于，在发酵生产2’‑
岩藻糖基乳糖及二岩藻糖基乳糖中的应用
。4.
如权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵生产2’‑
岩藻糖基乳糖及二岩藻糖基乳糖的方法包括如下步骤：（1）将大肠杆菌
K
‑
12 MG1655 BLBYZT6
接种于种子液培养基，获得种子液；（2）将种子液接种于发酵培养基进行发酵，获得发酵液；（3）发酵液经膜过滤
、
浓缩
、
乙酸结晶
、
离心后固形物干燥得2’‑
岩藻糖基乳糖晶体，乙酸结晶分离液经脱色
、
离子交换
、
浓缩
、
色谱分离
、
干燥后得二岩藻糖基乳糖
。5.
如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤（2）中，发酵培养基按如下浓度的成分配制：葡萄糖 5~40g/L、
乳糖 5~40g/L、
复配蛋白胨 10
～
15g/L、
酵母粉 20
～
30g/L、
磷酸氢二钾 10
～
20g/L、
磷酸二氢钾 1
～
5g/L、
微量金属元素 5~15...

【专利技术属性】
技术研发人员：李克文，李培功，栾庆民，孔刘娟，熊小兰，薛雅莺，张莉，袁世英，李珍珍，孙桂莲，段元良，李云飞，
申请(专利权)人：保龄宝生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：