本发明专利技术涉及宫颈癌DNA甲基化筛查技术领域,尤其涉及IPC C12Q1,更具体的涉及,一种宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
【技术实现步骤摘要】
一种宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒
[0001]本专利技术涉及宫颈癌DNA甲基化筛查
,尤其涉及IPC C12Q1,更具体的涉及,一种宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒。
技术介绍
[0002]宫颈癌的主要类型分为:宫颈鳞癌、腺癌及腺鳞癌,占所有宫颈癌的90%以上。高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续感染是导致宫颈癌发生及癌前病变的首要因素。
[0003]目前的宫颈细胞学检测主要采用宫颈液基细胞学检查法(thinprep cytologic test,TCT),取材于宫颈的新旧鳞
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柱上皮交界间的移行带处,观察宫颈鳞
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柱交界部位有无异型上皮变化。HPV检测主要检测高危型HPV。根据2022年《宫颈癌筛查工作方案》中的“高危型HPV检测流程图”,HPV16/18型阳性的感染者全部纳入阴道镜检查。而HPV16/18以外的其他高危型阳性或者未分型检测方法任何高危型阳性的感染者,经宫颈细胞学检查,无论异常还是可疑的患者,也都全部纳入阴道镜检查。因此,那些本属于轻度宫颈不典型增生(LSIL,也即CIN I),或者没有明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS),或者正常的感染者,本无必要做阴道镜检查取组织活检,根据《ACOG临床指南》可按宫颈炎处理或者不处理,3
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6个月随访即可。
[0004]DNA甲基化是公认的癌前阶段和进展阶段最常见的表观遗传学异常。抑癌基因DNA甲基化是肿瘤发生早期阶段抑癌基因功能失活的关键机制之一。宫颈癌的一些关键抑癌基因DNA甲基化已经在许多研究中被证实。一些单一基因的DNA甲基化检测试剂盒,检测的特异性和准确度低,容易造成假阴性,漏检率高。因此,本领域需要开发一种高检测率、高特异性、高准确度的多基因联合检测的宫颈癌相关基因DNA甲基化检测试剂盒。
技术实现思路
[0005]为了解决现有技术中的问题,本专利技术第一方面提供了一种宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒,包括核酸扩增试剂和对照品;
[0006]优选的,所述宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒检测的为6种宫颈癌相关抑癌基因,包括FAM19A4、PHACTR3、SST、ZIC1、PAX1、ZNF671。
[0007]优选的,所述核酸扩增试剂包括甲基化反应液A、甲基化反应液B、甲基化PCR Master MIX。
[0008]优选的,所述甲基化反应液A包括FAM19A4、PHACTR3、SST、ZIC1、PAX1、ZNF671中三种基因的引物和荧光探针,以及内部质控基因ACTB的引物和荧光探针、工艺用水。
[0009]优选的,所述甲基化反应液A包括ZNF671引物、ZNF671
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FAM荧光探针、FAM19A4引物、FAM19A4
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CY5荧光探针、PHACTR3引物、PHACTR3
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Texas Red荧光探针、ACTB引物、ACTB
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VIC荧光探针。
[0010]优选的,所述ZNF671引物包括40~60μmol/L ZNF671
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上游引物(SEQ ID NO.1)、40
~60μmol/L ZNF671
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下游引物(SEQ ID NO.2);所述ZNF671
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FAM荧光探针为40~60μmol/L ZNF671
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FAM(SEQ ID NO.3);
[0011]所述FAM19A4引物包括40~60μmol/L FAM+19A4
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上游引物(SEQ ID NO.4)、40~60μmol/L FAM19A4
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下游引物(SEQ ID NO.5);所述FAM19A4
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CY5荧光探针为40~60μmol/L FAM19A4
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CY5荧光探针(SEQ ID NO.6);
[0012]所述PHACTR3引物包括40~60μmol/L PHACTR3
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上游引物(SEQ ID NO.7)、40~60μmol/L PHACTR3
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下游引物(SEQ ID NO.8);所述PHACTR3
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Texas Red荧光探针为40~60μmol/L PHACTR3
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Texas Red荧光探针(SEQ ID NO.9);
[0013]所述ACTB引物包括40~60μmol/L ACTB
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上游引物(SEQ ID NO.19)、40~60μmol/L ACTB
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下游引物(SEQ ID NO.20);所述ACTB
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VIC荧光探针为40~60μmol/L ACTB
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VIC荧光探针(SEQ ID NO.21)。
[0014]优选的,所述ZNF671
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上游引物、ZNF671
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下游引物、ZNF671
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FAM荧光探针、FAM19A4
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上游引物、FAM19A4
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下游引物、FAM19A4
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CY5荧光探针、PHACTR3
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上游引物、PHACTR3
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下游引物、PHACTR3
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Texas Red荧光探针、ACTB
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上游引物、ACTB
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下游引物、ACTB
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VIC荧光探针、工艺用水的体积比为(3~5):(3~5):2:(3~5):(3~5):2:(3~5):(3~5):2:3:3:2;进一步优选的为3:3:2:3:3:2:3:3:2:3:3:2。
[0015]优选的,所述甲基化反应液A中工艺用水与甲基化反应液A的体积比为159:175。
[0016]优选的,所述甲基化反应液B包括FAM19A4、PHACTR3、SST、ZIC1、PAX1、ZNF671中三种基因的引物和荧光探针,以及内部质控基因ACTB的引物和荧光探针。
[0017]优选的,所述甲基化反应液B包括ZIC1引物、ZIC1
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FAM荧光探针、PAX1引物、PAX1
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CY5荧光探针、SST引物、SST
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Texas Red荧光探针、ACTB引物、ACTB
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VIC荧光探针。
[0018]优选的,所述ZIC1引物包括40~60μmol/L ZIC1
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上游引物(SEQ ID NO.10)、40~60μmol/L ZIC1
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下游引物(SEQ ID NO.11);所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
ACTB
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下游引物(SEQ ID NO.20);所述ACTB
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VIC荧光探针为40~60μmol/L ACTB
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VIC荧光探针(SEQ ID NO.21)。7.根据权利要求2所述的宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒,其特征在于,所述甲基化反应液A、甲基化反应液B、甲基化PCR Master MIX的体积比为1:1:(1.5~4)。8.一种根据权利要求1~7任一项所述的宫颈癌相关基因DNA甲基化PCR
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荧光探针法检测试剂盒的使用方法,其特征在于,抽提DNA,甲基化检测前样本处...
【专利技术属性】
技术研发人员:柯中和,毛志勇,陆雯,贺其志,浦筱雯,熊慧,何俊彦,谢立群,肖晓,徐任,罗碧珍,胡仕婕,陈嘉铮,陆孟超,黄爱天,
申请(专利权)人:上海市第一妇婴保健院苏州云泰生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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