一种蜂糖李开放式无糖培养的方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂糖李开放式无糖培养的方法，采用

【技术实现步骤摘要】
一种蜂糖李开放式无糖培养的方法


[0001]本专利技术涉及苗木无性繁殖
，特别涉及一种蜂糖李开放式无糖培养的方法
。

技术介绍

[0002]蜂糖李是从贵州地方李子品种中筛选的芽变新品种，目前主要在国内种植，因其高糖低酸，味甜似蜜的品质受到市场欢迎，供不应求
。
但实际生产中也发现，许多果园栽植的蜂糖李病毒病高发，常导致苗死园毁，造成较大的损失；且进入盛果期的蜂糖李，其树体枝条容易老化，树势衰落严重；而在苗木繁殖中，目前蜂糖李多采用扦插
、
分株繁殖，不仅繁殖速度慢，更加剧了病毒病的传播和后期树势的衰弱；上述问题已成为制约蜂糖李生产快速健康发展的主要因素
。
[0003]植物组织培养技术可利用研究材料的组织和器官快速繁殖出大量均匀的
、
遗传保真度高和健康无病毒植株，目前已在生产中被广泛应用
。
然而使用传统的组织培养方法也存在操作设备和技术要求高
、
操作程序烦琐
、
污染严重
、
生产成本高
、
移栽耗时费力且成活率低等问题，限制了该技术在生产的应用
。
为此，研究人员开发出了开放式组织培养和无糖组织培养两种方法
。
开放式组织培养是指在完全开放的自然有菌的环境中配制培养基且不经过高压灭菌锅灭菌，接种环节脱离超净工作台，最终达到与传统组织培养同样的效果
。
无糖栽培快繁苗技术原理则主要是建立在培养基中不含加工糖份的前提基础条件上，通过生物环境的调控等手段，使组织培养苗体加强幼苗自身细胞的快速光合作用，将异养型幼苗转化为高效光合自养型，从而达到有效地降低苗木生产成本，实现培育快速高效生长的优良品种幼苗群体的技术目的，该育苗技术主要强调通过使用一个容积足够大的育苗栽培专用容器，产出后的优质幼苗将更加的整齐健壮
。
若能将开放式组培技术与无糖培养技术相融合，将会更大程度能有效降低生产成本，提高苗木繁殖的效率，是未来一个大的发展趋势，但目前未见该类技术在李子
(
包括蜂糖李
)
上的报道
。
[0004]因此，以蜂糖李为材料，根据开放式组织培养和无糖组织培养技术的各自特点，采用无糖组织培养的培养方法，结合开放式组织培养的操作方法，对培养介质
、
组培器具消毒方法
、
培养体系抑菌剂
、
最佳培养基配方
、
培养条件进行筛选研究，建立一套开放
、
高效
、
低成本的蜂糖李开放式无糖组织培养体系，为蜂糖李的产业化生产提供技术支撑，亦为其它木本植物的繁育提供借鉴
。

技术实现思路

[0005]鉴于上述不足，本专利技术根据蜂糖李的特点，为筛选蜂糖李无糖培养技术体系，进行如下研究：
[0006]本专利技术是通过如下技术手段实现的：
[0007]一种蜂糖李培养基：
[0008]蜂糖李常规组培快繁体系建立和优化：
[0009]以蜂糖李为对象，研究外植体取材时间
、
消毒方法及基础培养基选择
、
从生芽诱导最适培养基选择
、
生根技术等，建立蜂糖李常规组培快繁体系，获得蜂糖李无毒组培苗
。
[0010]蜂糖李开放式无糖组培快繁体系的建立和优化：
[0011]以蜂糖李无毒组培苗为材料，建立和优化蜂糖李开放式无糖组织培养体系，主要内容为培养介质筛选
、
组培器具消毒方法筛选
、
抑菌剂筛选
、
快繁最佳培养基配方和培养条件的筛选
。
[0012]1、
研究方法
[0013]1.1
蜂糖李常规组培快繁体系建立和优化
[0014]①
无菌培养物的建立：以蜂糖李半木质化茎段为外植体，选取升汞
、
酒精为表面消毒剂，筛选出最佳的消毒剂组合和处理时间
。
[0015]②
常规组培快繁培养体系建立：以试验筛选出的最佳表面消毒剂处理获得的无菌外植体为材料，接种到含有上述各种植物基本培养基配方和各种植物生长调节剂配比组成的专用培养基上，筛选出上述各阶段最适的基本培养基种类和最佳的植物生长调节剂组合
。
开放式无糖培养基础抑菌剂组配筛选及生物毒性鉴定选择
NaClO4，山梨酸钾，农用链霉素
、
百菌清四种抑菌剂，评价抑菌剂的生物毒性和接种材料后的污染情况，筛选最佳的复配组合
。
[0016]1.2
蜂糖李开放式无糖组培快繁体系的建立和优化
[0017]①
培养介质筛选：采用无糖培养容器，以蛭石
、
琼脂为基质，筛选出适宜蜂糖李无糖培养的最佳介质
。
[0018]②
组培器具消毒剂筛选：选取
NaClO4为培养容器消毒剂，筛选最佳的处理和组合
。
[0019]③
蜂糖李开放式无糖快繁培养基筛选：根据常规组培获得的蜂糖李各阶段培养基，结合上述筛选获得的培养介质
、
组培器具消毒方法，筛选在开放式无糖培养条件下蜂糖李快繁的最佳基础培养基
、
植物生长调节剂组合和培养条件
。
[0020]2、
材料与方法
[0021]2.1
试验材料
[0022]试验材料为宜宾学院农林与食品工程学部试验农场引种的4年生蜂糖李嫁接苗
。
[0023]2.2
试验方法
[0024]2.2.1
蜂糖李常规组培快繁初代体系建立
[0025]在天气晴朗时，选取长势好
、
无病虫害且半木质化的蜂糖李茎段，除去
2/3
的叶片，在加有洗衣粉的溶液中浸泡
10min
，用毛刷清理茎段附生脏物，后流水冲洗
2h
，之后于超净工作台上依次用无菌水冲洗3次，
75
％酒精浸泡
45S
，无菌水冲洗3次，
0.1
％升汞浸泡
(
时间分别为
7min
，
8min
，
9min)
，无菌水冲洗4次，每次
30S
，消毒结束后，用无菌吸水纸吸干材料水分后，去除剩余的叶片和叶柄，将材料剪成单芽茎段，接种到初代培养基，其中初代培养基本培养基为
MS、1/2MS
和
WPM
，附加
0.5mg/L 6
‑
BA+0.1mg/L IAA、20g/L
蔗糖和
6.5g/L
琼脂，
pH
调节为
5.8
，接种后培养条件为光通量密度
70umol.m
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种蜂糖李培养基，包括：
WPM+0.5mg/L6
‑
BA+0.1mg/LIAA
；以及抑菌剂
。2.
根据权利要求1所述的培养基，其中：所述抑菌剂为：
0.2g/L
代森锰锌
+0.1g/L
百菌清
+2ml/LNaClO4+3ml/L
纳米艾叶精油
。3.
一种如权利要求1或2所述蜂糖李培养基的制备方法，包括：将灭菌的蛭石加入消毒培养容器中，厚度为3‑
4cm
；向容器中加入培养基至刚浸没培养介质；其中：灭菌的蛭石经高温蒸煮
30min
；培养容器采用如下方式消毒：加入没过容器底部的3％的
NaClO4，摇晃后静置
30
‑
60min。4.
一种根据权利要求3所述制备方法制得的蜂糖李培养基
。5.
一种根据权利要求
1、2、4
中任一培养基在蜂糖李开放式无糖培养中的应用，包括：
(1)
培养接种：剪取蜂糖李常规组培的不定芽，长度为2‑
3cm
，带1‑2片叶，接种至培养容器中；
(2)
开放式无糖培养：接好的蜂糖李茎段，暗处理4天后进行8天的照光培养，光照的同时通入
CO2，培养温度为
25℃
±
1℃
，相对湿度
80
±5％；
(3)
培养苗的移栽：待培养的蜂糖李苗生长至7‑
8cm
，移栽自田间
。6.
根据权利要求5所述的应用，其中：步骤
(1)
所述蜂糖李常规组培的不定芽由如下方法制得：
①
蜂糖李外植体选择；
②
蜂糖李外植体消毒；以及
③
蜂糖李组培不定芽诱导培养；其中：蜂糖李组培不定芽诱导培养基包括：
WPM+0.5mg/L6
‑
BA+0.1mg/LIAA
；蜂糖李组培不定芽诱导培养条件为：光通量密度
70umol.m

【专利技术属性】
技术研发人员：郭筱靖，周万海，冯瑞章，赵鑫，魏琴，刘雯雯，胡连清，张萍，
申请(专利权)人：宜宾学院，
类型：发明
国别省市：