一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法


[0001]本专利技术涉及药物制剂领域，尤其涉及一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法
。

技术介绍

[0002]胰岛素
(Insulin,INS)
最早发现于
1921
年
。
它是由胰脏内的胰岛
β
细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖
、
乳糖
、
核糖
、
精氨酸
、
胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素
。
胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原
、
脂肪
、
蛋白质合成的激素
。
作用机理属于受体酪氨酸激酶机制
。
[0003]目前，使用胰岛素治疗糖尿病的主要方法是通过多次皮下注射胰岛素或使用胰岛素泵进行皮下输注
。
但频繁的注射会给患者带来疼痛和不便，口服胰岛素减少了因注射带来的不便和疼痛，患者的治疗依从性强
。
然而，口服胰岛素的生物利用率低，大部分胰岛素在通过胃肠道后就被降解了
。
[0004]外泌体具有尺寸小
、
生物相容性高
、
循环稳定性好
、
免疫原性低和毒性小等优点，可以装载化学药物以及不同的核酸序列，是良好的药物递送载体
。
而牛奶外泌体作为食品来源的天然纳米颗粒，对胃肠道消化酶具有化学抗性，具有良好的稳定性和低的免疫原性，并且表现出优异的跨物种耐受性，牛奶外泌体能够穿透消化道进入血液循环系统，可将胰岛素运送至病理部位
。
因此，将牛奶外泌体作为载体包裹胰岛素作为新的口服药物载体，具有极高的研究价值
。
[0005]目前外泌体包裹药物的方法有多种，如电转法
、
超声法
、
冷冻法
、
孵育法等
。
其中电转法和超声法需要使用专业的设备，设备昂贵操作复杂需要专业人士，冷冻法和孵育法虽不需要使用专业设备和专业人员，但包裹效率低
。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，因此本专利技术拟采用牛奶外泌体作为药物载体，旨在提供一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，使得制备效率高，且方法简单容易实现
。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]提供一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1
：按
1:0.5
至
1:4
的质量比，将牛奶外泌体和胰岛素混合，得到混合液1；
[0010]S2
：向混合液1中加入质量体积比
0.1
％
‑
15
％的羧酸酯类化合物
、0.2
％
‑5％的氨基酸和
0.2
％
‑5％的果糖，得到混合液2；
[0011]S3
：采用冻融法对所述混合液2冻融处理1次或1次以上；
[0012]S4
：将冻融处理后的混合物离心，得到所述牛奶外泌体与胰岛素的复合物
。
[0013]进一步的，所述牛奶外泌体按照以下步骤制备
:
[0014]1)
在0‑
15℃
下，用乙酸
、
碳酸氢钠和氯化钠对牛奶样品进行预处理；
[0015]2)
将预处理后的牛奶样品通过离心分离，得到清液；
[0016]3)
所述清液用外泌体提取试剂盒提取，得到牛奶外泌体
。
[0017]进一步的，所述步骤
S3
中按照以下方式进行冻融处理：
[0018]在
‑5‑‑
30℃
的温度下，将所述混合液2急速冷冻，然后置于室温解冻至液体状态
。
[0019]进一步的，所述冻融处理重复进行4次
。
[0020]进一步的，所述羧酸酯类化合物为甲酸甲酯
、
甲酸乙酯
、
乙酸甲酯
、
乙酸乙酯
、
丙酸甲酯或丙酸乙酯
。
[0021]进一步的，所述氨基酸为必需氨基酸
。
[0022]进一步的，在冻融处理完成后且在离心之前，将混合物混匀并置于室温平衡
10
‑
60min。
[0023]进一步的，在步骤
S1
中，按
1:1
的质量比将牛奶外泌体和胰岛素混合；
[0024]在步骤
S2
中，向混合液1中加入质量体积比为
1.5
％的羧酸酯类化合物
、0.5
％的氨基酸和
0.6
％的果糖
。
[0025]进一步的，在步骤
1)
中，乙酸的质量体积比为
0.5
‑
15
％
、
碳酸氢钠的质量体积比为
0.2
％
‑4％
、
氯化钠的质量体积比为
0.2
％
‑6％
。
[0026]进一步的，在步骤
1)
中，预处理进行1‑
30
分钟
。
[0027]本专利技术中提供了一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，与现有技术相比，有益效果在于：
[0028]提供了一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，包括以下步骤：
S1
：按
1:0.5
至
1:4
的质量比，将牛奶外泌体和胰岛素混合，得到混合液1；
S2
：向混合液1中加入质量体积比
0.1
％
‑
15
％的羧酸酯类化合物
、0.2
％
‑5％的氨基酸和
0.2
％
‑5％的果糖，得到混合液2；
S3
：采用冻融法对所述混合液2冻融处理1次或1次以上；
S4
：将冻融处理后的混合物离心，得到所述牛奶外泌体与胰岛素的复合物
。
在混合液中加入羧酸酯类化合物
、
氨基酸和果糖进行冻融处理，提高了牛奶外泌体包裹胰岛素的效率，冻融处理只需一台冷冻冰箱，设备要求低，通过本方案，牛奶外泌体包裹胰岛素的效率达到了
71.43
％
。
附图说明
[0029]图
1A
是本专利技术实施例1中实验组牛奶样品离心处理后状态示意图；
[0030]图
1B
是本专利技术实施例1中对照组牛奶样品离心处理后状态示意图；
[0031]图2是本专利技术实施例1中的牛奶外泌体表面形貌图；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种牛奶外泌体与胰岛素的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1
：按
1:0.5
至
1:4
的质量比，将牛奶外泌体和胰岛素混合，得到混合液1；
S2
：向混合液1中加入质量体积比
0.1
％
‑
15
％的羧酸酯类化合物
、0.2
％
‑5％的氨基酸和
0.2
％
‑5％的果糖，得到混合液2；
S3
：采用冻融法对所述混合液2冻融处理1次或1次以上；
S4
：将冻融处理后的混合物离心，得到所述牛奶外泌体与胰岛素的复合物
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述牛奶外泌体按照以下步骤制备
:1)
在0‑
15℃
下，用乙酸
、
碳酸氢钠和氯化钠对牛奶样品进行预处理；
2)
将预处理后的牛奶样品通过离心分离，得到清液；
3)
所述清液用外泌体提取试剂盒提取，得到牛奶外泌体
。3.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤
S3
中按照以下方式进行冻融处理：在
‑5‑‑
30℃
的温度下，将所述混合液2急速冷冻，然后置于室温解冻至液体状态
。4.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冻融处理重复进行4次
。5.<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘好，伍虹剑，贾丽薇，唐诗韵，曾雅，
申请(专利权)人：深圳市拾方杰科技有限公司，
类型：发明
国别省市：