一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法技术

本发明专利技术公开了一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，涉及眼斑贝母兰组培技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法


[0001]本专利技术属于眼斑贝母兰组培
，特别是涉及一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法
。

技术介绍

[0002]眼斑贝母兰
(Coelogyne corymbosa)
属于兰科贝母兰属植物，产自云南西北部至东南部和西藏南部，生长在林缘树干上或湿润岩壁上
。
目前眼斑贝母兰被
《
中国生物多样性红色名录
‑
高等植物卷
》
收录，属于国家二级保护植物，因其唇瓣上有4个黄色
、
并围以橙红色的眼斑而得名，因其独特的观赏性状受到众多观赏者的喜爱
。
[0003]但由于眼斑贝母兰在自然条件下其种子很难独立发育成完整植株等问题，只依靠传统分株繁殖的方法无法满足市场需求，为此我们提供一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，用以解决眼斑贝母兰种苗快速繁育问题，减少野生资源的采挖，保护野生资源
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，能够有效提高眼斑贝母兰种苗繁育的速度及繁育数量，从源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现眼斑贝母优质种苗的工厂化生产，满足观赏需求，减少野生资源泛滥采挖的情况
。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]本专利技术为一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，包括如下步骤：
[0007]步骤
1、
外植体选择
[0008]选择健壮的眼斑贝母兰植株，在开花期间对其进行人工异花授粉，待果荚成熟时作为外植体；
[0009]步骤
2、
外植体消毒
[0010]剪除果荚残留的杂物，用自来水清洗果荚表面，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒，最后放到超净工作台上的无菌盘里备用；
[0011]步骤
3、
播种及初代培养
[0012]将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子沿着果脊解剖开，取出种子撒到初代培养基上进行暗培养，当种子萌发后再进行光培养；
[0013]步骤
4、
继代增值培养
[0014]萌发的眼斑贝母兰继续生长
45
‑
60
天左右，当叶片开始分化时，将种苗在无菌操作台上转接到继代培养基中培养
100
‑
120
天；
[0015]步骤
5、
生根壮苗培养
[0016]将培养
100
‑
120
天的无菌种苗转接至生根培养基中生根培养
180
‑
210
天；
[0017]步骤
6、
炼苗
、
驯化移栽
[0018]选取生根良好且健壮的组培苗，将其移至室外环境中放置
15
‑
20
天，避免强光直射使其适应外界环境；移栽时将种苗倒出洗净培养基，用稀释
800
‑
1000
倍的多菌灵浸泡种苗，
洗净阴干水分后将其移栽到基质中进行驯化
。
[0019]优选地，所述步骤1中外植体选择的具体方法包括：
[0020](1)
选择健壮植株，在4月中旬眼斑贝母兰开花期间对其进行人工异花授粉，精心培育6‑7个月；
[0021](2)
待果荚成熟时，采摘外壳完好无裂的黄绿色果荚放置到填塞有海绵的瓶子中，在
4℃
的环境下保存
24h。
[0022]优选地，所述步骤2中外植体消毒的具体方法包括：
[0023](1)
取出果荚，剪除果荚残留的干枯花瓣，用毛刷蘸取少量洗洁精水刷净种壳表面，清洗动作要轻柔以免擦破果荚，随后在自来水下冲洗8‑
10min
，并用无菌水冲洗2‑3次；
[0024](2)
将无菌水冲洗后的果荚放置到洁净烧杯中，移至接种室后在紫外灯下照射
30min
，随后在无菌操作台上采用
75
％医用酒精浸泡
3min
，无菌水清洗1次后再将果荚放入
0.1
％升汞中消毒
10min
，再用无菌水清洗3‑5次；
[0025](3)
最后将果荚用无菌滤纸吸干表面水分，放到超净工作台上的无菌盘里备用
。
[0026]优选地，所述步骤3中播种及初代培养的具体方法包括：
[0027](1)
将消毒好的果荚用冷却解剖刀截头去尾后，沿着果脊解剖开3‑4瓣，露出白色丝状的种子；
[0028](2)
将种子撒到初代培养基上，瓶盖过火焰消毒后盖到初代培养基上，将初代培养基移至培养室进行暗培养，暗培养温度为
25℃
，培养时间为
30
‑
45
天，种胚膨大呈绿色；
[0029](3)
随后进入光培养阶段，培养温度为
22
‑
25℃
，光照强度
1500x
，光照时间为8小时
/
天，初代培养基为：
MS+1mg/L NAA+0.25mg/L 6
‑
BA+I g/L
酸水解酪蛋白
+1g/L
活性炭
+30g/L
白砂糖
+3g/L
琼脂粉，
PH
调至
5.8
‑
6.0。
[0030]优选地，所述步骤4中继代增值培养的具体方法包括：
[0031]萌发的眼斑贝母兰种苗生长
45
‑
60
天，叶片开始分化，将种苗在无菌操作台上转接到继代培养基中培养
100
‑
120
天，培养温度为
22
‑
25℃
，光照强度为
1500lx
，光照时间为
8h/
天，继代增值培养基为：
1/2MS+0.25mg/L NAA+1.0mg/L 6
‑
BA+1g/L
酸水解酪蛋白，培养基琼脂量为
4g/L
，
PH
调至
5.8
‑
6.0。
[0032]优选地，所述步骤5中生根壮苗培养所用的培养基为：
1/2MS+1mg/L NAA+1.5mg/L IBA+1g/L
酸水解酪蛋白
+50g/L
香蕉
+50g/L
马铃薯
+1g/L
酸水解酪蛋白
+1g/L
活性炭
+30g/L
白砂糖，培养基琼脂量为
4g/L
；
[0033]培养条件为：培养温本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤
1、
外植体选择选择健壮的眼斑贝母兰植株，在开花期间对其进行人工异花授粉，待果荚成熟时作为外植体；步骤
2、
外植体消毒剪除果荚残留的杂物，用自来水清洗果荚表面，在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒，最后放到超净工作台上的无菌盘里备用；步骤
3、
播种及初代培养将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子沿着果脊解剖开，取出种子撒到初代培养基上进行暗培养，当种子萌发后再进行光培养；步骤
4、
继代增值培养萌发的眼斑贝母兰继续生长
45
‑
60
天左右，当叶片开始分化时，将种苗在无菌操作台上转接到继代培养基中培养
100
‑
120
天；步骤
5、
生根壮苗培养将培养
100
‑
120
天的无菌种苗转接至生根培养基中生根培养
180
‑
210
天；步骤
6、
炼苗
、
驯化移栽选取生根良好且健壮的组培苗，将其移至室外环境中放置
15
‑
20
天，避免强光直射使其适应外界环境；移栽时将种苗倒出洗净培养基，用稀释
800
‑
1000
倍的多菌灵浸泡种苗，洗净阴干水分后将其移栽到基质中进行驯化
。2.
根据权利要求1所述的一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，所述步骤1中外植体选择的具体方法包括：
(1)
选择健壮植株，在4月中旬眼斑贝母兰开花期间对其进行人工异花授粉，精心培育6‑7个月；
(2)
待果荚成熟时，采摘外壳完好无裂的黄绿色果荚放置到填塞有海绵的瓶子中，在
4℃
的环境下保存
24h。3.
根据权利要求1所述的一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，所述步骤2中外植体消毒的具体方法包括：
(1)
取出果荚，剪除果荚残留的干枯花瓣，用毛刷蘸取少量洗洁精水刷净种壳表面，清洗动作要轻柔以免擦破果荚，随后在自来水下冲洗8‑
10min
，并用无菌水冲洗2‑3次；
(2)
将无菌水冲洗后的果荚放置到洁净烧杯中，移至接种室后在紫外灯下照射
30min
，随后在无菌操作台上采用
75
％医用酒精浸泡
3min
，无菌水清洗1次后再将果荚放入
0.1
％升汞中消毒
10min
，再用无菌水清洗3‑5次；
(3)
最后将果荚用无菌滤纸吸干表面水分，放到超净工作台上的无菌盘里备用
。4.
根据权利要求1所述的一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法，其特征在于，所述步骤3中播种及初代培养的具体方法包括：
(1)
将消毒好的果荚用冷却解剖刀截头去尾后，沿着果脊解剖开3‑4瓣，露出白色丝状的种子；
(2)
将种子撒到初代培养基上，瓶盖过火焰消毒后盖到初代培养基上，将初代培养基移至培养室进行暗培养，暗培养温度为
25℃
，培养时间为
30
‑
45
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭应杰，和寿星，黄杏娥，徐春莲，郭承刚，汤王外，杨文宏，曹杨，王玲，苏畅，
申请(专利权)人：云南省农业科学院高山经济植物研究所，
类型：发明
国别省市：